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雨落樱木123

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 178
帖子: 2
在线: 13.3小时
虫号: 3144443
注册: 2014-04-17
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 连目的基因的表达载体电转到GS115，YPDS平板上只长了一两个或不长。

本人新手做毕赤酵母表达。使用的表达载体是 pPICZαA ，在测序结果正确后，根据Easy Select™ Pichia Expression Kit For Expression of Recombinant Proteins Using p PICZ and p PICZα in Pichia pastoris 这个文献，做电转化到毕赤酵母GS115的实验，具体是将线性化后的连接液与酵母感受态电转化后迅速加1mL山梨醇然后37℃热浴1小时，然后避光分量涂布在YPDS的平板上，30℃培养箱中培养，但是两天后发现平板上有的没长，有的只长了两个，再继续培养几天还是没长且已长的菌落不是很大。接着挑了几个长的菌诱导表达，发现没有酶活。这个过程虽然影响因素很多但是我做了三次（有一次是电转后没有热浴直接离心，涂板时去掉了一部分的山梨醇。）都是这样的结果，所以我想知道在这个过程中具体哪些步骤出现了问题，除了质粒提取（已验证没问题）。求各位大神不吝指导。谢谢！！

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