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kingjazz23

金虫 (小有名气)

[求助] PCR条带 已有2人参与

PCR后 跑胶的时候没有条带出来 右边为marker 片段大小1500左右 前面的两个应该是引物二聚体吧 cDNA是新的 引物为去年找公司合成的 用的是easy taq酶 体系为“94 5分钟 94 30秒 56 30秒 72 1分钟 72 10分钟”
之前也跑过一次 cDNA是去年的 连前面的两个引物二聚体也没有 这次cDNA是新的 也没跑出来 因为没什么经验 所以不太清楚什么原因 请大家帮忙分析一下

PCR条带


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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先你的胶跑的质量太差了,成像仪参数也没设置好,具体你的目的片段多大也不清楚,cDNA质量怎么样也不清楚,引物退火温度有没有摸索呢……

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-04-02 21:01:40
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kingjazz23

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-02 21:01:40
首先你的胶跑的质量太差了,成像仪参数也没设置好,具体你的目的片段多大也不清楚,cDNA质量怎么样也不清楚,引物退火温度有没有摸索呢……

成像的时候主要是因为胶的底下铺了一张保鲜膜 可能铺得不平整 新的cDNA的260/280在2.0以上 当时怀疑有DNA的污染 退火温度之前考察过 之前用这个温度跑是可以跑出来的

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3楼2016-04-03 08:54:17
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kungfu2016

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以摸索一下DNA浓度实验或是镁离子浓度实验

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4楼2016-04-03 12:09:22
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kingjazz23

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by kungfu2016 at 2016-04-03 12:09:22
可以摸索一下DNA浓度实验或是镁离子浓度实验

这两个实验没有做过 具体是怎样的?可以和我解释一下吗 谢谢了

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5楼2016-04-03 14:49:22
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kungfu2016

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-04-03 14:49:22
这两个实验没有做过 具体是怎样的?可以和我解释一下吗 谢谢了
...

DNA模板取不同体积;单独添加不同体积的硫酸镁溶液,具体终浓度查试试剂说明书上下波动

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6楼2016-04-03 16:16:12
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ljj-lian

木虫 (小有名气)

建议做一下温度梯度。同时调整一下退火的时间,退火的时间根据你用的酶的说明书来,希望帮到你

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7楼2016-04-06 16:03:53
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