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连接T载体成功后发现连的不是目的基因 已有2人参与
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首先，我们的基因是从基因组文库中拿到的。 第一步做PCR扩增， 采用的是25ul的反应体系，引物为xho1和Bamh1，各取0.5ul,模版0.25ul，2*taq22.5ul，dd水11.25ul 过程是30个循环，95度3min,95度30s,53度30s,72度2min,,72度10min,4度keep 跑胶后结果有一些杂带，其中有一条是小于500bp,我们的目的基因是1800多bp, 第二步是琼脂糖凝胶回收了1800bp的那条带， 第三步是连接T载体过夜，（T载体是takara的pmd 18-t vector cloing kit） 第四步是转化到感受态细胞内然后涂板（氨苄） 然后长出来了点，我挑了五个点，然后用PCR产物做正对照，目的基因的两条引物，发现跑出的条带均为不足500bp的， 接着我还是再用那五个点，用t载体的引物，发现跑出的仍然为500bp  Des_splash.png |
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3楼2016-03-29 23:01:31
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