| 查看: 1350 | 回复: 6 | ||
[求助]
连接T载体成功后发现连的不是目的基因 已有2人参与
|
|
首先，我们的基因是从基因组文库中拿到的。 第一步做PCR扩增， 采用的是25ul的反应体系，引物为xho1和Bamh1，各取0.5ul,模版0.25ul，2*taq22.5ul，dd水11.25ul 过程是30个循环，95度3min,95度30s,53度30s,72度2min,,72度10min,4度keep 跑胶后结果有一些杂带，其中有一条是小于500bp,我们的目的基因是1800多bp, 第二步是琼脂糖凝胶回收了1800bp的那条带， 第三步是连接T载体过夜，（T载体是takara的pmd 18-t vector cloing kit） 第四步是转化到感受态细胞内然后涂板（氨苄） 然后长出来了点，我挑了五个点，然后用PCR产物做正对照，目的基因的两条引物，发现跑出的条带均为不足500bp的， 接着我还是再用那五个点，用t载体的引物，发现跑出的仍然为500bp  Des_splash.png |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有12人回复
-
售中科院一区文章，我:8 O 5 5 1 O 5 4，含JCR-TOP
已经有4人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有12人回复
-
基金申报
已经有4人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有4人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
-
参与限项
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液测序常见的问题
已经有2人回复
- 2013年奇幻《波西·杰克逊与魔兽之海》720p.BD中英双字幕
已经有1人回复
- [欧美][奇幻][波西·杰克逊与魔兽之海][BD-RMVB/735M][英语中字][2013最新魔幻大作]
已经有0人回复
- 翻译过的请润色，没有翻译的请翻译为英文
已经有2人回复
- 目的片段中含有酶切位点，求解决方案
已经有3人回复
- 转录组研究前沿
已经有21人回复
- 【推荐】干细胞牛人
已经有11人回复
张凡云
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 13400.3
- 散金: 3094
- 红花: 13
- 帖子: 4097
- 在线: 1483.9小时
- 虫号: 2426111
- 注册: 2013-04-19
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2016-03-29 23:01:04
张凡云
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 13400.3
- 散金: 3094
- 红花: 13
- 帖子: 4097
- 在线: 1483.9小时
- 虫号: 2426111
- 注册: 2013-04-19
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2016-03-29 23:01:31
4楼2016-03-31 10:20:53
5楼2016-03-31 11:29:28
6楼2016-04-01 17:00:31
7楼2016-04-02 15:36:25