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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 单酶切为什么切不开啊
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)

[求助] 单酶切为什么切不开啊 已有1人参与

切了好几天了。pPIC9K载体，目标基因。大肠杆菌内。提出质粒。跑电泳很亮。sacl内切酶线性化质粒，单酶切半个小时，跑电泳，应该只有一条带啊，跑出来三条，我要的线性化太暗了，无法胶回收。。？这几天急死我了。这是单酶切结果

单酶切为什么切不开啊


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1楼 2016-03-29 17:58:34
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这应该是做回收吧？多切会，这种情况，我一般切一个小时（快酶），要是慢酶，切过夜。
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2楼2016-03-29 20:41:43
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rfywoaini

银虫 (初入文坛)
酶切时间太短了吧，半小时………

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萧瑟秋风今又是，换了人间。
3楼2016-03-29 21:08:27
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-29 20:41:43
你这应该是做回收吧？多切会，这种情况，我一般切一个小时（快酶），要是慢酶，切过夜。

做转化啊。回收完了转化。。过夜会不会切坏啊

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4楼2016-03-30 12:57:45
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rfywoaini at 2016-03-29 21:08:27
酶切时间太短了吧，半小时………

单酶切。。那我多切会儿

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5楼2016-03-30 12:57:58
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geneyhh

金虫 (正式写手)
过夜吧，质粒定量，1ug加1ul酶，质粒最好是新提取的

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6楼2016-03-30 21:33:42
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by geneyhh at 2016-03-30 21:33:42
过夜吧，质粒定量，1ug加1ul酶，质粒最好是新提取的

好的。谢谢

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7楼2016-03-31 11:41:40
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xiaochen..

新虫 (初入文坛)
一是 ，酶切时间太短了；二是，再检查一下自己的酶和buffer是不是对应的，最好保证6滴

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8楼2016-03-31 11:59:27
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xiaochen..

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaochen.. at 2016-03-31 11:59:27
一是 ，酶切时间太短了；二是，再检查一下自己的酶和buffer是不是对应的，最好保证6滴

保证酶在相应的buffer中活性最高
（刚才手抖没打完）

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9楼2016-03-31 12:00:49
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