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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)

[求助] 单酶切为什么切不开啊 已有1人参与

切了好几天了。pPIC9K载体,目标基因。大肠杆菌内。提出质粒。跑电泳很亮。sacl内切酶线性化质粒,单酶切半个小时,跑电泳,应该只有一条带啊,跑出来三条,我要的线性化太暗了,无法胶回收。。?这几天急死我了。这是单酶切结果

单酶切为什么切不开啊


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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这应该是做回收吧?多切会,这种情况,我一般切一个小时(快酶),要是慢酶,切过夜。
2楼2016-03-29 20:41:43
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rfywoaini

银虫 (初入文坛)

酶切时间太短了吧,半小时………

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萧瑟秋风今又是,换了人间。
3楼2016-03-29 21:08:27
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-03-29 20:41:43
你这应该是做回收吧?多切会,这种情况,我一般切一个小时(快酶),要是慢酶,切过夜。

做转化啊。回收完了转化。。过夜会不会切坏啊

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4楼2016-03-30 12:57:45
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by rfywoaini at 2016-03-29 21:08:27
酶切时间太短了吧,半小时………

单酶切。。那我多切会儿

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5楼2016-03-30 12:57:58
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geneyhh

金虫 (正式写手)

过夜吧,质粒定量,1ug加1ul酶,质粒最好是新提取的

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6楼2016-03-30 21:33:42
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七只蛋挞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by geneyhh at 2016-03-30 21:33:42
过夜吧,质粒定量,1ug加1ul酶,质粒最好是新提取的

好的。谢谢

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7楼2016-03-31 11:41:40
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xiaochen..

新虫 (初入文坛)

一是 ,酶切时间太短了;二是,再检查一下自己的酶和buffer是不是对应的,最好保证6滴

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8楼2016-03-31 11:59:27
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xiaochen..

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by xiaochen.. at 2016-03-31 11:59:27
一是 ,酶切时间太短了;二是,再检查一下自己的酶和buffer是不是对应的,最好保证6滴

保证酶在相应的buffer中活性最高
(刚才手抖没打完)

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9楼2016-03-31 12:00:49
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