应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 候选基因扩增，求助！！
51/1返回列表
查看: 425  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

空地上的飞鹰

新虫 (小有名气)

[求助] 候选基因扩增，求助！！ 已有1人参与

各位虫友，大家好，我做的是大豆突变体定位。最近，一直在做候选基因的筛选。主要是测序。但最近利用突变体的RNA进行转录组测序，其琼脂糖凝胶的条带总是看不见，二次PCR时也没有多少条带。而且有条带的其条带大小却和我的基因大小相差很多。另外测序回来的样品好多有双峰，应该怎样避免双峰。恳请大家给点建议。
1.括基因应该注意啥?
2.琼脂糖凝胶120v，400mA这样设计可以不？
3.双峰怎么避免？谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-25 14:43:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空地上的飞鹰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tbsjxy at 2016-03-25 15:21:15
第一，首先你要确保你RNA提取没有问题，你检测都看不见条带，确定可以做下去？建议用试剂盒提。
第二，扩增条带和目的基因差很多的话，先确定一下你设计的引物特异性好不好，如果没有问题的话，差别大的话也是有可 ...

谢谢，我感觉也是，我测了一下Rna的浓度才50多，不知道多少比较合适？我就用的试剂盒提的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-25 19:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

tbsjxy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一，首先你要确保你RNA提取没有问题，你检测都看不见条带，确定可以做下去？建议用试剂盒提。
第二，扩增条带和目的基因差很多的话，先确定一下你设计的引物特异性好不好，如果没有问题的话，差别大的话也是有可能，考虑是插入突变或融合基因的可能。
第三，测序双峰，最直接的解决方法是构建载体去测序，当然也可以考虑先切胶回收试试，具体要看看胶图怎么样，建议问下测序公司客服的意见。
根据楼主的叙述，问题出在第一步的可能性较大。
赞一下(1人) 回复此楼
该用户由于违规已被禁言一辈子
2楼2016-03-25 15:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +4 a089 2026-08-07 4/200 2026-08-08 12:15 by arzu_hma
[基金申请] fileCode有新解读？ +8 Tide man 2026-08-08 16/800 2026-08-08 09:59 by Tide man
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭