应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 候选基因扩增，求助！！
31/1返回列表
查看: 422  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

空地上的飞鹰

新虫 (小有名气)

[求助] 候选基因扩增，求助！！ 已有1人参与

各位虫友，大家好，我做的是大豆突变体定位。最近，一直在做候选基因的筛选。主要是测序。但最近利用突变体的RNA进行转录组测序，其琼脂糖凝胶的条带总是看不见，二次PCR时也没有多少条带。而且有条带的其条带大小却和我的基因大小相差很多。另外测序回来的样品好多有双峰，应该怎样避免双峰。恳请大家给点建议。
1.括基因应该注意啥?
2.琼脂糖凝胶120v，400mA这样设计可以不？
3.双峰怎么避免？谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-25 14:43:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tbsjxy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一，首先你要确保你RNA提取没有问题，你检测都看不见条带，确定可以做下去？建议用试剂盒提。
第二，扩增条带和目的基因差很多的话，先确定一下你设计的引物特异性好不好，如果没有问题的话，差别大的话也是有可能，考虑是插入突变或融合基因的可能。
第三，测序双峰，最直接的解决方法是构建载体去测序，当然也可以考虑先切胶回收试试，具体要看看胶图怎么样，建议问下测序公司客服的意见。
根据楼主的叙述，问题出在第一步的可能性较大。
赞一下(1人) 回复此楼
该用户由于违规已被禁言一辈子
2楼2016-03-25 15:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空地上的飞鹰

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tbsjxy at 2016-03-25 15:21:15
第一，首先你要确保你RNA提取没有问题，你检测都看不见条带，确定可以做下去？建议用试剂盒提。
第二，扩增条带和目的基因差很多的话，先确定一下你设计的引物特异性好不好，如果没有问题的话，差别大的话也是有可 ...

谢谢，我感觉也是，我测了一下Rna的浓度才50多，不知道多少比较合适？我就用的试剂盒提的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-25 19:29:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 空地上的飞鹰 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 基金中了 +13 laoda193707 2026-08-06 13/650 2026-08-07 20:33 by tchen18
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭