| 查看: 1589 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
绝对定量PCR
|
|||
|
目的基因片段长度 在 600多bp 材料是土壤，试剂盒提取土壤DNA，以DNA直接作为模板来做定量（有参考文献） 标准品是质粒梯度稀释而成 引物来自于参考文献中 年前做的时候 体系是 25uL的 模板2 引物2 染料 12.5 补足ddw 结果如图1 2 所示 溶解曲线是很漂亮的单峰，证明引物的特异性非常好 标准曲线 在低倍浓度时候 出现质粒污染 而且ＤＮＡ浓度片段 导致样品分布在标准曲线以外 年后再做的时候 质粒污染很好控制了 结果如图 ３ ４ 所示 用的同样的引物 体系20uL的 引物1 模板1 燃料10 结果标准曲线可以了，但是溶解曲线出现问题 样品出现杂峰 请问这个杂峰是不是由于引物特异性不好造成的？？ 但是 我前后两次用的 引物是同样的（年后又让生工重新做的引物） 反应条件也没变 请问这到底是什么情况？？头疼 都做快半年 了，请各位大神支支招 目前只有7 个金币了 大家见谅  1.png  2.png  3.png  4.png |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
|
具体不清楚，我的是在77℃，有你86℃的那种二聚体似的峰。换了新模板就没有了。初步猜测是我操作问题，经常吹打模板，导致模板有断的。你的75℃有峰，83℃有小峰，可能是有污染。你有没有反复冻融 or 吹打取样 ? 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-24 12:46:37
2楼2016-03-24 00:02:56
3楼2016-03-24 12:33:00
5楼2016-03-24 12:47:32