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[求助]
绝对定量PCR
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目的基因片段长度 在 600多bp 材料是土壤，试剂盒提取土壤DNA，以DNA直接作为模板来做定量（有参考文献） 标准品是质粒梯度稀释而成 引物来自于参考文献中 年前做的时候 体系是 25uL的 模板2 引物2 染料 12.5 补足ddw 结果如图1 2 所示 溶解曲线是很漂亮的单峰，证明引物的特异性非常好 标准曲线 在低倍浓度时候 出现质粒污染 而且ＤＮＡ浓度片段 导致样品分布在标准曲线以外 年后再做的时候 质粒污染很好控制了 结果如图 ３ ４ 所示 用的同样的引物 体系20uL的 引物1 模板1 燃料10 结果标准曲线可以了，但是溶解曲线出现问题 样品出现杂峰 请问这个杂峰是不是由于引物特异性不好造成的？？ 但是 我前后两次用的 引物是同样的（年后又让生工重新做的引物） 反应条件也没变 请问这到底是什么情况？？头疼 都做快半年 了，请各位大神支支招 目前只有7 个金币了 大家见谅  1.png  2.png  3.png  4.png |
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10楼2016-03-26 21:49:08
2楼2016-03-24 00:02:56
3楼2016-03-24 12:33:00
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具体不清楚，我的是在77℃，有你86℃的那种二聚体似的峰。换了新模板就没有了。初步猜测是我操作问题，经常吹打模板，导致模板有断的。你的75℃有峰，83℃有小峰，可能是有污染。你有没有反复冻融 or 吹打取样 ? 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-03-24 12:46:37
5楼2016-03-24 12:47:32
6楼2016-03-25 09:54:58
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7楼2016-03-26 18:06:09
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8楼2016-03-26 18:07:42
