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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 提取质粒遇到的问题,希望高级虫虫赐教!

最近提取一株未知菌株的质粒DNA,可总是提不出来,电泳检测结果显示前面有一条弥散的条带,点样孔中还有DNA样品,请问怎样做能改善试验啊?
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amberking

点样孔应该是没去除的杂蛋白,1%左右浓度的胶溴酚蓝前面是RNA

杂质没去除一般倒也问题不大,你把溶液3的Ph值测一下,如果高质粒是提不出来的
恩,或者溶液2的SDS时间久了,重配吧

要去除杂质,酚/氯仿多抽提几次,加点DNaseI好了
恩,还有重拿一管抗生素用
6楼2008-10-23 14:28:57
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恒星年

银虫 (正式写手)

前面弥散的是不是RNA啊?跑不出来有可能是蛋白质没除干净,如果蛋白存余较多会影响电泳。
2楼2008-10-21 21:17:51
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zhongdianshi

银虫 (小有名气)

此菌是否在已知的抗性平板上生长正常?
提取质粒的试剂是否正常工作?
提取出来的质粒是否可以转化感受态,在已知的抗性平板上生长?
弥散的条带有可能是RNA,“点样孔的DNA”可能是拿到的DNA不纯,杂蛋白太多,或者基因组DNA,滞留在加样孔。

假设你手头的菌没有问题,在正确的抗性LB中,过夜培养。
你的提取质粒试剂没有问题。
提取的过程没问题。
你的胶没问题。
你的电泳缓冲液用新鲜的。
。。。
引用回帖:
Originally posted by 經天 at 2008-10-20 00:01:
最近提取一株未知菌株的质粒DNA,可总是提不出来,电泳检测结果显示前面有一条弥散的条带,点样孔中还有DNA样品,请问怎样做能改善试验啊?

3楼2008-10-22 07:07:15
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j2

木虫 (正式写手)

试剂盒提的?不应该蛋白杂志这么多啊。确定试剂没问题?
修炼ing,当虫仙……
4楼2008-10-22 09:06:02
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