应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 提取质粒遇到的问题，希望高级虫虫赐教！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 810  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 提取质粒遇到的问题，希望高级虫虫赐教！

最近提取一株未知菌株的质粒DNA，可总是提不出来，电泳检测结果显示前面有一条弥散的条带，点样孔中还有DNA样品，请问怎样做能改善试验啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
1楼 2008-10-20 00:01:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)
前面弥散的是不是RNA啊？跑不出来有可能是蛋白质没除干净，如果蛋白存余较多会影响电泳。
赞一下 回复此楼
2楼2008-10-21 21:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongdianshi

银虫 (小有名气)
此菌是否在已知的抗性平板上生长正常？
提取质粒的试剂是否正常工作？
提取出来的质粒是否可以转化感受态，在已知的抗性平板上生长？
弥散的条带有可能是RNA，“点样孔的DNA”可能是拿到的DNA不纯，杂蛋白太多，或者基因组DNA，滞留在加样孔。

假设你手头的菌没有问题，在正确的抗性LB中，过夜培养。
你的提取质粒试剂没有问题。
提取的过程没问题。
你的胶没问题。
你的电泳缓冲液用新鲜的。
。。。
引用回帖:
Originally posted by 經天 at 2008-10-20 00:01:
最近提取一株未知菌株的质粒DNA，可总是提不出来，电泳检测结果显示前面有一条弥散的条带，点样孔中还有DNA样品，请问怎样做能改善试验啊？

赞一下 回复此楼
3楼2008-10-22 07:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j2

木虫 (正式写手)
试剂盒提的？不应该蛋白杂志这么多啊。确定试剂没问题？
赞一下 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2008-10-22 09:06:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)
恩建议用试剂盒提，会好很多，我们的菌就是很难提质粒DNA，不用试剂盒提的时候多糖物质和蛋白很难除去，但是倒没有你说的那么夸张。
赞一下 回复此楼
5楼2008-10-22 15:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amberking

点样孔应该是没去除的杂蛋白，1%左右浓度的胶溴酚蓝前面是RNA

杂质没去除一般倒也问题不大，你把溶液3的Ph值测一下，如果高质粒是提不出来的
恩，或者溶液2的SDS时间久了，重配吧

要去除杂质，酚/氯仿多抽提几次，加点DNaseI好了
恩，还有重拿一管抗生素用
赞一下 回复此楼
6楼2008-10-23 14:28:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)
谢谢各位的指教！
前面的条带比较宽，有在溴酚蓝前面，也有在后面的，可能是RNA，试剂应该没有问题吧，后来我全部重新配了，结果还是一样，不过摇菌的时间比较长，16h，因为是这株菌的质粒没有提过，文献上说大约有5种质粒，可我一个也没有提到，郁闷！
再提几次，多进行蛋白质的去除，再加RNase，一定要提出来！

[ Last edited by 經天 on 2008-10-24 at 10:14 ]
赞一下 回复此楼
一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
7楼2008-10-24 10:13:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
可能你的菌就没有质粒啊，或者很大一般的方法提不出来的
赞一下 回复此楼
帮助虫友，提升自己
8楼2008-10-24 21:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

platanus

木虫 (著名写手)
你前面弥散的带应该是ＲＮＡ，你说摇了１６个小时，应该是没有问题的，一般俄抗生素在１６个小时之内是还不会失效的！
赞一下 回复此楼
9楼2008-10-27 22:09:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hiking8715

金虫 (小有名气)
不是有RNA消化酶吗，加上后，半个小时后就可以了
赞一下 回复此楼
10楼2008-10-28 20:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 經天 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕333求调剂 +8 北道巷 2026-03-24 8/400 2026-03-27 10:18 by 我是小康
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 调剂求收留 +7 果然有我 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:26 by wxiongid
[考研] 071000生物学求调剂，初试成绩343 +6 小小甜面团 2026-03-25 6/300 2026-03-26 23:01 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭