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經天

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 提取质粒遇到的问题，希望高级虫虫赐教！

最近提取一株未知菌株的质粒DNA，可总是提不出来，电泳检测结果显示前面有一条弥散的条带，点样孔中还有DNA样品，请问怎样做能改善试验啊？
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1楼 2008-10-20 00:01:57
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zhongdianshi

银虫 (小有名气)
此菌是否在已知的抗性平板上生长正常？
提取质粒的试剂是否正常工作？
提取出来的质粒是否可以转化感受态，在已知的抗性平板上生长？
弥散的条带有可能是RNA，“点样孔的DNA”可能是拿到的DNA不纯，杂蛋白太多，或者基因组DNA，滞留在加样孔。

假设你手头的菌没有问题，在正确的抗性LB中，过夜培养。
你的提取质粒试剂没有问题。
提取的过程没问题。
你的胶没问题。
你的电泳缓冲液用新鲜的。
。。。
引用回帖:
Originally posted by 經天 at 2008-10-20 00:01:
最近提取一株未知菌株的质粒DNA，可总是提不出来，电泳检测结果显示前面有一条弥散的条带，点样孔中还有DNA样品，请问怎样做能改善试验啊？

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3楼2008-10-22 07:07:15
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恒星年

银虫 (正式写手)
前面弥散的是不是RNA啊？跑不出来有可能是蛋白质没除干净，如果蛋白存余较多会影响电泳。
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2楼2008-10-21 21:17:51
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j2

木虫 (正式写手)
试剂盒提的？不应该蛋白杂志这么多啊。确定试剂没问题？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2008-10-22 09:06:02
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helenfang

铜虫 (小有名气)
恩建议用试剂盒提，会好很多，我们的菌就是很难提质粒DNA，不用试剂盒提的时候多糖物质和蛋白很难除去，但是倒没有你说的那么夸张。
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5楼2008-10-22 15:29:57
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