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保肝活性研究。 已有3人参与
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各位虫友，本人最近在设计药物保肝活性筛选实验方案。对于选用正常肝细胞和hepg2细胞做细胞实验有些纠结。谁能告诉我，他们之间哪个好。我主要是筛药的保肝活性。急急急，非常感谢 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2016-03-24 06:15:24
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【答案】应助回帖
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1. 大鼠以3％戊巴比妥钠60mg/kg麻醉后，依次碘酒、乙醇消毒； 2. 以十字型切口打开腹腔，暴露内脏，将肠管推向腹腔的左侧，暴露出下腔静脉和门静脉，首先游离出下腔静脉，将胆总管结扎。然后分离门静脉，将其分支一一结扎，并在门静脉的近端和远端分别预置“0”号丝线一根，用针管内预先吸有肝素的l8号套管针穿刺门静脉，退出针芯，见门静脉有回血后结扎固定，迅速接通灌注系统，并剪开下腔静脉建立流出道，以20ml/min的速率灌注预灌注液(37℃)，同时将肝脏完整地分离下来，置入一平皿中； 3. 灌注约10 min后，肝脏完全变为淡黄褐色，关闭预灌注液三通开关，以15 ml／min速率灌注50 ml(25 mg)链蛋白酶E灌注液，然后再以15 ml／min速率灌注含Ⅳ型胶原酶的灌注液(37℃)； 4. 将一根一次性输液管一端浸入培养皿液面以下，另一端插入胶原酶溶液瓶，建立胶原酶的循环灌注； 5. 20～25 min后，当肝脏组织完全变软，撕去肝包膜，去除结缔组织，钝性粉碎肝组织制备细胞悬液 6. 分同管 7. 加CCl4 及加保肝样品或溶剂 8. 37℃ 1-2hr 9. 看细胞數 量GPT/GOT http://pan.baidu.com/s/1dEzibVN ----------------------------------------------------------------------------------- 也可用老鼠体内做 不分肝细胞 http://www.wjgnet.com/1009-3079/6/19.asp http://www.yp900.com/lunwen_jichuyixue/450.htm |
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