| 查看: 1419 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
酵母感受态电转阴性对照长出转化子的问题 已有1人参与
|
|||
|
各位大牛，事情是这样的: 我制备了毕赤酵母SMD1168的感受态， 将重组的α-amylase电转进毕赤酵母。然而，操作了两次发现，阴性对照，即SMD1168感受态不论是电转后凃板还是直接凃板，都长出了转化子（奔溃中。。。 ） ，涂布的是MD板， 想着不太可能啊， 因为感受态里面根本没有his标记，怎么可能长出转化子呢， 会不会是MD板制备中的某些成分失效了？ MD板配方（100ml）：1g甘油、1.5g琼脂，90ml ddH2O。121℃灭菌20min后加入事先过滤除菌的200ul生物素和10ml的YNB. 第二次制备感受态中， 涂布电转后的SMD1168时，使用了新制备的MD板和半年前配好的MD板涂布， 结果：新板长出了转化子，旧板没有长转化子。 请问如何解释呢。好崩溃。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有143人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 急求！GFP载体转化野生型枯草芽孢杆菌以及红霉素浓度
已经有15人回复
brown-eyes
新虫 (初入文坛)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 8.2
- 红花: 1
- 帖子: 13
- 在线: 2.7小时
- 虫号: 3440247
- 注册: 2014-09-25
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
|
你的配方跟我的不一样啊 *MD，MDH (minimal dextrose medium±histidine) 1L 1.34% YNB 4×10-5%生物素2%葡萄糖 1 灭菌800ml 水 2 于60 度下加入100ml 10×YNB，2ml 500×B, 100ml 10×D 3 制MDH 时，加入10ml 100×H,混匀存于4 度 4 如制备平板，于第一步加入15g琼脂粉 5 倒置平板，4 度放置几个月 1.确定你的培养基各个组分没有受到蛋白胨，酵母粉等的污染，重新按照上述配方配制MD。 2.需要确定你的SMD1168是不是有问题：分别划板MD,YPD（倒平板时加点氨苄和卡那，防止E.coli的污染。） 如果MD长了，就是你的SMD1168有问题呗。 |
3楼2016-04-22 11:08:07
2楼2016-04-21 17:10:25
4楼2017-05-17 23:44:41