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酵母感受态电转阴性对照长出转化子的问题 已有1人参与
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各位大牛，事情是这样的: 我制备了毕赤酵母SMD1168的感受态， 将重组的α-amylase电转进毕赤酵母。然而，操作了两次发现，阴性对照，即SMD1168感受态不论是电转后凃板还是直接凃板，都长出了转化子（奔溃中。。。 ） ，涂布的是MD板， 想着不太可能啊， 因为感受态里面根本没有his标记，怎么可能长出转化子呢， 会不会是MD板制备中的某些成分失效了？ MD板配方（100ml）：1g甘油、1.5g琼脂，90ml ddH2O。121℃灭菌20min后加入事先过滤除菌的200ul生物素和10ml的YNB. 第二次制备感受态中， 涂布电转后的SMD1168时，使用了新制备的MD板和半年前配好的MD板涂布， 结果：新板长出了转化子，旧板没有长转化子。 请问如何解释呢。好崩溃。。。。 |
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2楼2016-04-21 17:10:25
【答案】应助回帖
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你的配方跟我的不一样啊 *MD，MDH (minimal dextrose medium±histidine) 1L 1.34% YNB 4×10-5%生物素2%葡萄糖 1 灭菌800ml 水 2 于60 度下加入100ml 10×YNB，2ml 500×B, 100ml 10×D 3 制MDH 时，加入10ml 100×H,混匀存于4 度 4 如制备平板，于第一步加入15g琼脂粉 5 倒置平板，4 度放置几个月 1.确定你的培养基各个组分没有受到蛋白胨，酵母粉等的污染，重新按照上述配方配制MD。 2.需要确定你的SMD1168是不是有问题：分别划板MD,YPD（倒平板时加点氨苄和卡那，防止E.coli的污染。） 如果MD长了，就是你的SMD1168有问题呗。 |
3楼2016-04-22 11:08:07
4楼2017-05-17 23:44:41
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