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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 出现非目的条带的原因
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xxz紫桐

铜虫 (初入文坛)

[求助] 出现非目的条带的原因 已有4人参与

请教一下，出现非目的的条带主要是可能是什么原因？
对引物进行试验，结果是不可能出现条带的，可是还是出现了，是跟扩增程序有关系吗？
左边是用95℃  30s，58℃  30s，72℃  60s ，30个cycles扩增的，右边是95℃  30s，54℃  5min，72℃  60s ，5 cycles；95℃  30s，60℃  30s，72℃  60s，30个cycles。
左边不出现条带是正常的，可为什么右边拖带那么严重，是有非特异性条带出现吗？

出现非目的条带的原因
3.jpg
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1楼 2016-03-18 09:17:58
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小虫s

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by xxz紫桐 at 2016-03-18 16:36:01
这个还真没办法，引物的使用方法不一样，所需要的引物序列等等也就不一样了，文献上使用过的，不是没考虑过，可是找不到符合条件的。除了换引物，就没有别的办法了吗？...

可以考虑目的条带切胶测序，然后再设计引物

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12楼2016-03-19 07:53:43
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个模板应该是大片段或者基因组吧，你是如何确定引物是不可能有非特异性条带呢，看你的图，感觉不仅仅 是pcr条件的问题，更可能是引物质量不行。

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-03-18 09:36:51
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xxz紫桐

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-18 09:36:51
你这个模板应该是大片段或者基因组吧，你是如何确定引物是不可能有非特异性条带呢，看你的图，感觉不仅仅 是pcr条件的问题，更可能是引物质量不行。

因为设计引物时是专门设计了在模板里面找不到的片段的，有在NCBI上面比对过的。
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3楼2016-03-18 10:26:49
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2016-03-18 11:11:16
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