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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒双酶切
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amberhwk

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切

Pcold 载体提质粒后用Ecok I 和Xba I进行双酶切，应该切下两条带，哪一个是应该回收的呢，我做的时候总切不下来，是为什么用的是takara 公司的酶

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1楼 2016-03-16 09:37:07
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ken19860823

木虫 (正式写手)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-27 08:10:38
EcoRI 和XbaI因为都在多克隆位点，所以相当于线性化载体。载体是4470bp,所以回收旧行。怎么又是你，你们都没有师兄师姐指导的吗？
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做基因修饰的老菜鸡
3楼2016-03-16 10:34:02
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普通回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)
★
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表达载体当然是用大的条带呀，酶是否失效、酶切时间适当延长、质粒提取质量
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2楼2016-03-16 09:55:00
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youwid

新虫 (初入文坛)
★
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看载体图谱或序列，可以知道自己要的是哪段，大小多少。takara的有些酶是不好用，如果实在切不下来就加大酶量或者换个公司的酶。或者一个酶一个酶的切。
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4楼2016-03-16 10:37:37
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xiao_monv

新虫 (初入文坛)
★
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这个看你需要的是哪个片段了
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5楼2016-03-16 10:49:52
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amberhwk

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-16 10:34:02
EcoRI 和XbaI因为都在多克隆位点，所以相当于线性化载体。载体是4470bp,所以回收旧行。怎么又是你，你们都没有师兄师姐指导的吗？

又是我，被你发现了，我师姐研三，已经出去实习，在学校时间很少

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6楼2016-03-16 11:38:52
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war3one

金虫 (著名写手)
★
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看看公用buffer用的对不对，保证两个酶的效率
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7楼2016-03-17 13:25:07
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amberhwk

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by war3one at 2016-03-17 13:25:07
看看公用buffer用的对不对，保证两个酶的效率

Buffer 是对的，按照公司提供的加的

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8楼2016-03-17 16:28:44
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peptide3986

铜虫 (初入文坛)
★
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看质粒图谱啊~~~
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9楼2016-03-17 17:38:25
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hua_geduo

木虫 (正式写手)
★
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你的载体的构建完的，还是没有外源片段的？如果需要载体，就回收大的片段；还有不一定非要用Takara的酶，虽然是名牌，切不切的开，看你切的时候的条件，如果一下切不开两个点，可以试试先用一个酶切，再用另一个酶切
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10楼2016-03-24 16:58:38
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