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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒双酶切
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amberhwk

新虫 (小有名气)

[交流] 质粒双酶切

Pcold 载体提质粒后用Ecok I 和Xba I进行双酶切，应该切下两条带，哪一个是应该回收的呢，我做的时候总切不下来，是为什么用的是takara 公司的酶

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1楼 2016-03-16 09:37:07
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hua_geduo

木虫 (正式写手)
★
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你的载体的构建完的，还是没有外源片段的？如果需要载体，就回收大的片段；还有不一定非要用Takara的酶，虽然是名牌，切不切的开，看你切的时候的条件，如果一下切不开两个点，可以试试先用一个酶切，再用另一个酶切
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10楼2016-03-24 16:58:38
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卡维斯

金虫 (正式写手)
★
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表达载体当然是用大的条带呀，酶是否失效、酶切时间适当延长、质粒提取质量
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2楼2016-03-16 09:55:00
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ken19860823

木虫 (正式写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-27 08:10:38
EcoRI 和XbaI因为都在多克隆位点，所以相当于线性化载体。载体是4470bp,所以回收旧行。怎么又是你，你们都没有师兄师姐指导的吗？
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做基因修饰的老菜鸡
3楼2016-03-16 10:34:02
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youwid

新虫 (初入文坛)
★
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看载体图谱或序列，可以知道自己要的是哪段，大小多少。takara的有些酶是不好用，如果实在切不下来就加大酶量或者换个公司的酶。或者一个酶一个酶的切。
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4楼2016-03-16 10:37:37
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