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ss2007jj

银虫 (初入文坛)

[求助] 一次性连接多个酶切位点的方法 已有2人参与

我准备构建一个多元件的质粒,比如我要用到Xbal、BamHl、Xhol、EcoRl等四个酶切位点,将启动子、SD序列、GFP连接到一起,怎么才能够高效的进行呢,能不能一次就完成。
文献看到过Gibson连接法,貌似是用三种酶混在一起使用的,价格不便宜,问问有没有人有过这方面的经验呢?
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
overlap扩增,然后同源重组进去可以了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2016-03-14 17:12:28
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用管什么酶切位点了,直接上Gibson组装吧,一次性解决问题……
用酶切连接的话,会多少影响基因结构的,而且太麻烦……
2楼2016-03-14 13:57:37
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Gibson不贵的,现在已经很便宜了,现在很多国内厂家都有相应产品。
3楼2016-03-14 13:58:15
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