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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 一次性连接多个酶切位点的方法
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ss2007jj

银虫 (初入文坛)

[求助] 一次性连接多个酶切位点的方法 已有2人参与

我准备构建一个多元件的质粒，比如我要用到Xbal、BamHl、Xhol、EcoRl等四个酶切位点，将启动子、SD序列、GFP连接到一起，怎么才能够高效的进行呢，能不能一次就完成。
文献看到过Gibson连接法，貌似是用三种酶混在一起使用的，价格不便宜，问问有没有人有过这方面的经验呢？
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1楼 2016-03-14 10:33:01
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不用管什么酶切位点了，直接上Gibson组装吧，一次性解决问题……
用酶切连接的话，会多少影响基因结构的，而且太麻烦……
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2楼2016-03-14 13:57:37
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Gibson不贵的，现在已经很便宜了，现在很多国内厂家都有相应产品。
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3楼2016-03-14 13:58:15
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wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
overlap扩增，然后同源重组进去可以了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2016-03-14 17:12:28
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