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xiong1990

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[求助] PCR条带时有时无求解已有4人参与

做了3个多月的RT-PCR,始终条带都不是很亮(我的目的基因文献中都说是高表达而且比较稳定)，偶尔p不出来条带，但是内参都能P出来，前的几次P不出来排除后发现是引物失效了，重新合成引物后又有条带了，过完年再做2次又没有P出条带，重新合成引物也还是弄不出来，好着急，哪位大神能帮我指点下问题出在哪？顺便问一下大家的引物都是用什么稀释的？

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崩溃啊！！！关于转化已经有4人回复

1楼2016-03-13 20:33:48

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xiong1990

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引用回帖:

3楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-14 09:11:15
你的引物怎么合成三次？你用的次数有那么多么？一般用到的引物都是稀释成10um/L,储备液是稀释成100um/L.你的这个用量太恐怖。一般引物合成的引物会给你一个稳定的nmol数，比如8.2nmol，那么你就加82ul水，这样就是1 ...

我的引物用量没那么大，主要是前几次合成的引物不知道什么原因都p不出条带，就只好重新合成

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