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琼脂糖凝胶跑成这个样子
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zhangchong12
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琼脂糖凝胶跑成这个样子
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做的PCR,条带在3000bp左右,因为是要在后面进行重叠PCR,引物比较固定,希又大神指导,这是什么原因造成的
优化高保真酶按照taq酶的条件进行2016-03-11 14 时 26 分.jpg
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1楼
2016-03-12 16:13:45
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原海亮
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【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
这个就是pcr条件需要优化的吧,这么多杂带,退火温度还是可以优化下,高保真酶建议直接进行退火温度摸索,不要参考taq酶,论坛里已经好多人出现taq摸好的条件到高保真不适用,同时建议做不加酶和不加模板对照,方便分析,祝好!
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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼
2016-03-12 17:10:15
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2楼
:
Originally posted by
原海亮
at 2016-03-12 17:10:15
这个就是pcr条件需要优化的吧,这么多杂带,退火温度还是可以优化下,高保真酶建议直接进行退火温度摸索,不要参考taq酶,论坛里已经好多人出现taq摸好的条件到高保真不适用,同时建议做不加酶和不加模板对照,方便 ...
我的引物就是 模板序列,我已经试了好多温度了,几乎都是这么多带
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3楼
2016-03-12 17:27:20
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素黑好好学习
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专业: 微生物学
有可能是水被DNA污染了,建议把做PCR的水换掉
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4楼
2016-03-13 08:43:54
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早春的雨雾
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【答案】应助回帖
有可能是电泳缓冲液的问题,电泳槽里面是不是新换的缓冲液
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5楼
2016-03-16 17:09:01
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zhangchong12
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专业: 生物大分子结构与功能
是啊 每次 做的时候 我都会新换一次溶液
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6楼
2016-03-16 19:36:17
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