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zhangchong12

新虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶跑成这个样子 已有2人参与

做的PCR,条带在3000bp左右,因为是要在后面进行重叠PCR,引物比较固定,希又大神指导,这是什么原因造成的

琼脂糖凝胶跑成这个样子
优化高保真酶按照taq酶的条件进行2016-03-11 14 时 26 分.jpg
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个就是pcr条件需要优化的吧,这么多杂带,退火温度还是可以优化下,高保真酶建议直接进行退火温度摸索,不要参考taq酶,论坛里已经好多人出现taq摸好的条件到高保真不适用,同时建议做不加酶和不加模板对照,方便分析,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-12 17:10:15
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-12 17:10:15
这个就是pcr条件需要优化的吧,这么多杂带,退火温度还是可以优化下,高保真酶建议直接进行退火温度摸索,不要参考taq酶,论坛里已经好多人出现taq摸好的条件到高保真不适用,同时建议做不加酶和不加模板对照,方便 ...

我的引物就是 模板序列,我已经试了好多温度了,几乎都是这么多带

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3楼2016-03-12 17:27:20
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素黑好好学习

新虫 (初入文坛)

有可能是水被DNA污染了,建议把做PCR的水换掉

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4楼2016-03-13 08:43:54
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早春的雨雾

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有可能是电泳缓冲液的问题,电泳槽里面是不是新换的缓冲液
5楼2016-03-16 17:09:01
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zhangchong12

新虫 (小有名气)

是啊 每次 做的时候 我都会新换一次溶液

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6楼2016-03-16 19:36:17
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