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prthefu

木虫 (著名写手)

[交流] 在所有条件都已经摸索好的情况下,我的pcr总是出不来呢 已有10人参与

在之前,师兄师姐们已经把我要pcr的各种条件,包括引物、体系的各个量、程序等都已经摸索好了,之前师兄说他p出来,再测序,结果都对,这才给我的,但是,我在重复做的时候,反复了几次,最后得到的电泳图是下面那个样子的,为什么啊
附:电泳图中级位置有一个目的条带,但是杂带好多啊啊啊啊啊啊

在所有条件都已经摸索好的情况下,我的pcr总是出不来呢
P60312-130706.jpg
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nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
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原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这个看着目的条带还是比较明显的了,拖带可能是模板降解,或者pcr体系的成分有污染,建议重新制备模板,引物如果有新的尽量重新溶解。如果实验紧急,这个可以延长跑胶时间,把目的条带切胶回收,继续下一步实验,同时一边进行pcr产物重新制备,祝好!

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-03-12 17:17:27
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笑面佛008

新虫 (小有名气)

4楼2016-03-12 18:45:54
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-12 17:17:27
你这个看着目的条带还是比较明显的了,拖带可能是模板降解,或者pcr体系的成分有污染,建议重新制备模板,引物如果有新的尽量重新溶解。如果实验紧急,这个可以延长跑胶时间,把目的条带切胶回收,继续下一步实验, ...

你是高手啊,为什么每次解答都挺详细的,而且,对于我这个比较笨的人来说,我居然也可以看懂
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6楼2016-03-12 19:17:05
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卡维斯

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR实验条件优化好并不意味着所有的实验可以用这个条件呦。
引物合成质量、降解;模板质量、浓度;加样情况;PCR仪的运行状态;酶的活性,等等好多的,
建议摸索好的条件尽快进行实验,长时间搁置应该重新制备和稀释所需组分,最好先优化下条件。
8楼2016-03-12 19:57:20
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普通回帖

永恒的微笑

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
原因可能有多种,之一是你样品降解了,模板浓度不合适,或者引物放久了。。。。。。

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2楼2016-03-12 15:03:12
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 永恒的微笑 at 2016-03-12 15:03:12
原因可能有多种,之一是你样品降解了,模板浓度不合适,或者引物放久了。。。。。。

引物好像是年前合成的,这样,算久吗
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5楼2016-03-12 19:15:50
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原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by prthefu at 2016-03-12 19:17:05
你是高手啊,为什么每次解答都挺详细的,而且,对于我这个比较笨的人来说,我居然也可以看懂...

以前实验室带学弟学妹,这样问题很常见,因为我也是学识有限,大概也只能解释比较简单的问题,让他们知道整个操作的原理,和出现问题的可能原因,太难的还是要请高手了,哈哈

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
7楼2016-03-12 19:28:43
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prthefu

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-12 19:28:43
以前实验室带学弟学妹,这样问题很常见,因为我也是学识有限,大概也只能解释比较简单的问题,让他们知道整个操作的原理,和出现问题的可能原因,太难的还是要请高手了,哈哈
...

谦虚啦,觉得你挺有耐心的,挺好····
nothing is impossible in this world,if you have the will to win,you can achieve anything
9楼2016-03-12 20:32:51
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hawkinghj

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
跑胶的时候用模板做对照没?看看模板是不是被降解
10楼2016-03-13 10:47:32
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