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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 在所有条件都已经摸索好的情况下，我的pcr总是出不来呢
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prthefu

木虫 (著名写手)

[交流] 在所有条件都已经摸索好的情况下，我的pcr总是出不来呢 已有10人参与

在之前，师兄师姐们已经把我要pcr的各种条件，包括引物、体系的各个量、程序等都已经摸索好了，之前师兄说他p出来，再测序，结果都对，这才给我的，但是，我在重复做的时候，反复了几次，最后得到的电泳图是下面那个样子的，为什么啊
附：电泳图中级位置有一个目的条带，但是杂带好多啊啊啊啊啊啊

在所有条件都已经摸索好的情况下，我的pcr总是出不来呢
P60312-130706.jpg
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
1楼 2016-03-12 14:23:52
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你这个看着目的条带还是比较明显的了，拖带可能是模板降解，或者pcr体系的成分有污染，建议重新制备模板，引物如果有新的尽量重新溶解。如果实验紧急，这个可以延长跑胶时间，把目的条带切胶回收，继续下一步实验，同时一边进行pcr产物重新制备，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-03-12 17:17:27
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永恒的微笑

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
原因可能有多种，之一是你样品降解了，模板浓度不合适，或者引物放久了。。。。。。

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2楼2016-03-12 15:03:12
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笑面佛008

新虫 (小有名气)
建议提高退火温度试试。

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4楼2016-03-12 18:45:54
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prthefu

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 永恒的微笑 at 2016-03-12 15:03:12
原因可能有多种，之一是你样品降解了，模板浓度不合适，或者引物放久了。。。。。。

引物好像是年前合成的，这样，算久吗
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
5楼2016-03-12 19:15:50
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