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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » CRISPR/Cas系列问题
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王继楼马 at 2016-03-11 21:57:33
有专门介绍这个技术的，基础的和比较深的都有。不过既然你已经看过了，我觉得就不说了。请问你看的是哪一篇文献？可以发个题目么？抽空我也去看一看。另外，我感觉你第五条是不是理解错了。Donor DNA是用来基因重组 ...

Donor DNA是用来同源重组的时候，作为修复模板的，那个问题我大概清楚了，Donor DNA应该是和genomic target结合的，通过同源臂进行重组，不知道我这样理解对不对？还有我说的那篇文献是DiCarlo在13年发的，叫Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems，你可以去看看，到时我们再交流一下
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11楼2016-03-11 22:16:42
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王继楼马 at 2016-03-11 21:57:33
有专门介绍这个技术的，基础的和比较深的都有。不过既然你已经看过了，我觉得就不说了。请问你看的是哪一篇文献？可以发个题目么？抽空我也去看一看。另外，我感觉你第五条是不是理解错了。Donor DNA是用来基因重组 ...

还有你刚刚说的有专门介绍这种技术的，我想再了解一下，可能是我之前看得不够深入，所以想问问有什么书籍或者文献可以介绍一下
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12楼2016-03-11 22:20:43
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ken19860823

木虫 (正式写手)
单链也可以做模板，别看低于9点的文章，搜索张峰的文章看。文章发下名字，让大家参考下。

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做基因修饰的老菜鸡
13楼2016-03-11 22:23:17
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-11 22:23:17
单链也可以做模板，别看低于9点的文章，搜索张峰的文章看。文章发下名字，让大家参考下。

好的，不好意思，这点我没做好，那个问题我还是不太懂，我自己回去再好好理解一下吧，这篇文章是《Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems》
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14楼2016-03-11 22:26:22
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
忘记把这篇文章贴出来了，这篇文章是DiCarlo在2013年发表的《Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems》
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15楼2016-03-11 22:27:45
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zhangyugre

新虫 (小有名气)
你们也是做酵母的吗？

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16楼2016-03-12 13:50:52
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zhangyugre at 2016-03-12 13:50:52
你们也是做酵母的吗？

对啊 你们课题组也是吗？

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17楼2016-03-12 13:53:31
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zhangyugre

新虫 (小有名气)
那可以交流交流。

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18楼2016-03-12 22:33:02
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pam与临近基序之间插入突变序列，一般是加一个终止密码子并使pam突变以及一个酶切位点，两个作用：使pam突变不再被cas识别；终止密码子是插入靶基因使靶基因提前表达终止；酶切位点是用于筛选的。突变是复制在修复模板上的，发生重组时，利用修复模板在基因组切口处引入突变；不用修复模板也是可以的，利用的是同源染色体作为修复模板，或者随机插入，但这种方式达到目的突变概率比较低。

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19楼2016-03-13 13:03:21
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

pam与临近基序之间插入突变序列，一般是加一个终止密码子并使pam突变以及一个酶切位点，两个作用：使pam突变不再被cas识别；终止密码子是插入靶基因使靶基因提前表达终止；酶切位点是用于筛选的。突变是复制在修复模板上的，发生重组时，利用修复模板在基因组切口处引入突变；不用修复模板也是可以的，利用的是同源染色体作为修复模板，或者随机插入，但这种方式达到目的突变概率比较低。

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20楼2016-03-13 13:03:31
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