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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » CRISPR/Cas系列问题
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-13 13:03:21
pam与临近基序之间插入突变序列，一般是加一个终止密码子并使pam突变以及一个酶切位点，两个作用：使pam突变不再被cas识别；终止密码子是插入靶基因使靶基因提前表达终止；酶切位点是用于筛选的。突变是复制在修复模 ...

谢谢您的回复！不过还是有些地方不明白，首先你说的插入突变序列是指同源重组后插入的片段吗？然后突变PAM序列应该就是为了不让CAS9蛋白识别，再次发生切割。还有就是将那个终止密码子插入到靶基因中使它提前表达终止是为了什么？
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21楼2016-03-13 21:51:58
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-03-13 21:51:58
谢谢您的回复！不过还是有些地方不明白，首先你说的插入突变序列是指同源重组后插入的片段吗？然后突变PAM序列应该就是为了不让CAS9蛋白识别，再次发生切割。还有就是将那个终止密码子插入到靶基因中使它提前表达终 ...

提前表达终止，这个基因就不能表达成完整蛋白，也就失去了作用。

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22楼2016-03-13 23:26:34
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-03-13 21:51:58
谢谢您的回复！不过还是有些地方不明白，首先你说的插入突变序列是指同源重组后插入的片段吗？然后突变PAM序列应该就是为了不让CAS9蛋白识别，再次发生切割。还有就是将那个终止密码子插入到靶基因中使它提前表达终 ...

我觉得你可以看论文中的示意图，就能很容易理解了。

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23楼2016-03-13 23:28:14
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by kingjazz23 at 2016-03-13 21:51:58
谢谢您的回复！不过还是有些地方不明白，首先你说的插入突变序列是指同源重组后插入的片段吗？然后突变PAM序列应该就是为了不让CAS9蛋白识别，再次发生切割。还有就是将那个终止密码子插入到靶基因中使它提前表达终 ...

2015年有一篇白念CRISPR/cas9构建的论文，你可以看看。思路很不错的。

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24楼2016-03-13 23:30:49
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Jena_fungus

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
24楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-13 23:30:49
2015年有一篇白念CRISPR/cas9构建的论文，你可以看看。思路很不错的。
...

请问一下这篇文章题目是？
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25楼2016-03-14 12:35:40
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
引用回帖:
25楼: Originally posted by Jena_fungus at 2016-03-14 12:35:40
请问一下这篇文章题目是？...

A Candida albicans CRISPR system permits genetic engineering of essential genes and gene families
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26楼2016-03-14 13:51:16
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
25楼: Originally posted by Jena_fungus at 2016-03-14 12:35:40
请问一下这篇文章题目是？...

A Candida albicans CRISPR system permits genetic engineering of essential genes and gene families
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27楼2016-03-14 13:51:35
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AliTheFox

金虫 (小有名气)
我想知道这个PAM中文是什么鬼？

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28楼2016-03-14 15:18:48
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
引用回帖:
28楼: Originally posted by AliTheFox at 2016-03-14 15:18:48
我想知道这个PAM中文是什么鬼？

有很多不同的中文翻译，大概意思就是原间隔序列旁边的基序，我一般是念原间隔序列旁基序
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29楼2016-03-14 17:23:17
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Jena_fungus

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
27楼: Originally posted by Bioexperixgs at 2016-03-14 13:51:35
A Candida albicans CRISPR system permits genetic engineering of essential genes and gene families...

谢谢
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30楼2016-03-14 19:40:35
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