24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 570  |  回复: 4

小学生55555

新虫 (初入文坛)

[求助] 求大神指教!!! 已有1人参与

P一个基因,大约600多bp.从一个质粒P下来并加入一个酶切位点,用的酶是Pfu保真酶,做了30循环。退火温度也恰当。刚开始能P出来,但量特别少,后来就P不出来了,谁能告诉是怎么一回事啊,无限郁闷啊!!!

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小学生55555

新虫 (初入文坛)

2楼2016-03-11 09:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR这个实验本身就有很多不确定因素。
对于你的实验描述来说“刚开始能P出来,但量特别少”,一般质粒扩增是最容易的,这可能是你的质粒模板浓度太低或者是降解了?,建议重新提取质粒。
“后来就P不出来了“ 引物质量?酶保存?Pfu酶在使用时最好不要加入太多的引物。
以上都没有问题那尝试一下touch-down程序或者设置梯度优化退火。
3楼2016-03-11 10:11:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安静de执着14

新虫 (著名写手)

正如楼上所言,不确定因素太多了,除了楼上所说的,还有其他因素,比如你在配制反应体系的时候有没有漏加,退火温度是否合适?P完以后是立刻跑胶还是放置时间太长DNA降解呢?

发自小木虫Android客户端
4楼2016-03-11 10:20:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小学生55555

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-11 10:11:09
PCR这个实验本身就有很多不确定因素。
对于你的实验描述来说“刚开始能P出来,但量特别少”,一般质粒扩增是最容易的,这可能是你的质粒模板浓度太低或者是降解了?,建议重新提取质粒。
“后来就P不出来了“ 引物 ...

谢谢,我再好好筛查一下个个条件

发自小木虫Android客户端
5楼2016-03-11 18:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小学生55555 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +6 梁富贵险中求 2026-04-04 6/300 2026-04-05 09:37 by MinkyXMQ
[考研] 081700化学工程与技术 一志愿中海洋 323 求调剂学校 +16 披星河 2026-04-03 16/800 2026-04-05 09:00 by dick_runner
[考研] 081700,311,求调剂 +12 冬十三 2026-04-04 13/650 2026-04-05 08:43 by qlm5820
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 306求调剂 +3 hyb上名工 2026-04-02 3/150 2026-04-04 18:12 by 热情沙漠
[基金申请] 同年申报,是不是就不会派给你函评本子了? +4 redcom 2026-03-29 4/200 2026-04-04 10:08 by kudofaye
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 求调剂,一志愿北京中医药大学 +3 小小达不溜 2026-04-02 3/150 2026-04-03 22:55 by 冲矢昴星团
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[考研] 334求调剂 +9 Trying] 2026-03-31 9/450 2026-04-03 15:18 by 琢珥丶
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +6 兔兔兔111223314 2026-03-29 8/400 2026-04-02 22:37 by louise0220
[考研] 275学硕081000服从调剂到其他专业,保不住本专业了 +7 一只小小水牛 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:23 by alice-2022
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 一志愿346上海大学生物学 +3 上海大学346调剂 2026-04-01 3/150 2026-04-02 08:36 by w虫虫123
[考研] 一志愿北京科技,085601总分305求调剂 +9 半生瓜! 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 070300化学专业279调剂 +10 哈哈哈^_^ 2026-03-31 10/500 2026-03-31 23:13 by liu823948201
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考研] 262求调剂 +7 ZZ..000 2026-03-30 8/400 2026-03-31 10:05 by cal0306
[考研] 本科211总分289,08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
信息提示
请填处理意见