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高拷贝质粒变成低拷贝，可能吗？！ 已有1人参与
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最近用pGEM T-easy 构建了一个载体（在多克隆位点区插入大约4kb片段），总长度大约7KB，这个载体转入DH5a能狗很好的提取质粒，，5ML菌液可以提取50ul质粒，浓度达到468ng/ul， 实验室用的是OMEGA 质粒小提盒子，可是当我双酶切插入GFP（大约800bp）， 获得阳性克隆，提取质粒的时候遇到问题了，，质粒却成了低拷贝，用5ml菌液最后浓度才10ng/ul, 我跟空载体同时做，发现空载体可以提的很好 （说明试剂盒没有问题），就是插入片段的质粒菌，浓度很低。这是什么原因？ 推测：质粒太长？！不太可能 DH5a菌株有问题？造成裂解有问题？！ |
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8楼2016-03-22 11:36:33
ken19860823
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2楼2016-03-11 08:10:36
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ken19860823
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4楼2016-03-11 12:12:47