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fuyiwy

新虫 (初入文坛)

[求助] trizol 法提取植物总RNA. 已有2人参与

本人最近在用trizol法提取植物总RNA,但不知道所用方法是不是最优化,求trizol法提取植物总RNA比较优化的方法以及后续的琼脂糖凝胶检测RNA质量的具体操作步骤和注意事项。谢谢各位大神指点了!!
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jackyoung

新虫 (正式写手)

看啥植物和什么组织了,富含多糖多酚的用Trizol效果不好。琼脂糖电泳很简单,最好用DEPC水配缓冲液,专用的电泳槽,1.2%的胶,最好将样品预染,总上样量1ug左右(此处为我们实验室的经验体系,因检测方法而异)

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CestLaVie
2楼2016-03-07 21:12:51
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悠然8912

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fuyiwy: 金币+3, 有帮助 2016-03-09 14:29:37
首先所有的离心管研钵镊子药匙等用具都要做除RNA酶处理,这是实验成功的关键。
1ml 提取液里加适当液氮研磨的组织粉末充分混匀,静置5min,离心5min,取上清加五分之一提取液体积的氯仿混匀,静置5min,离心15min,取上清加等体积异丙醇静置10min离心10min,弃上清,沉淀加75%乙醇离心5min,空干乙醇加RNase free water溶解RNA即可。
电泳的话最好是专门跑RNA的一套装置,我们用TAE 跑10min就行。

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3楼2016-03-07 22:19:56
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fuyiwy: 金币+2, 有帮助 2016-03-09 14:32:30
如2楼所说,多糖多酚的植物只能用专门的植物RNA提取试剂盒。
提取RNA么有那么多讲究,一个字快,一般提取2个样,从液氮研磨开始到RNA溶解在水中,60分钟以内。
不是让你手忙脚乱,是一步一步中间不要闲着,一口气按照试剂盒说明书做,肯定没问题,顺便说下,我是生物公司的,所以这方面比较有经验。
有你真好
4楼2016-03-08 11:03:32
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qingchul

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 悠然8912 at 2016-03-07 22:19:56
首先所有的离心管研钵镊子药匙等用具都要做除RNA酶处理,这是实验成功的关键。
1ml 提取液里加适当液氮研磨的组织粉末充分混匀,静置5min,离心5min,取上清加五分之一提取液体积的氯仿混匀,静置5min,离心15min,取 ...

这是你自己用的还是别的地方找过来的

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5楼2016-05-28 10:15:34
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