应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR 条带不亮
81/1返回列表
查看: 1453  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qiu_ni

银虫 (小有名气)

[交流] PCR 条带不亮

PCR扩增几条氮循环相关的基因，引物是由已知序列设计的，但是扩增结果不理想，大多数条带都不是很亮，与所跑Marker 相差甚远。试图增加过扩增循环数，但是效果不理想，也增加过退火温度，但有的基因就直接扩增不出来。求问各位大神这是怎么回事？能否给点参考意见。不甚感激。
回复此楼

» 猜你喜欢
nozuonodie
1楼 2016-03-04 15:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Esther_zhang

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
qiu_ni: 金币+1, 可以试试 2016-03-04 15:30:31
可以从增加引物浓度或者模板量，降低退火温度等方面试试啊。你增大退火温度，估计只会越P越弱。
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-04 15:21:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
qiu_ni: 金币+1 2016-03-04 17:00:07
用slow-down的程序吧，百试不爽。
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
3楼2016-03-04 15:41:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiu_ni

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-04 15:41:08
用slow-down的程序吧，百试不爽。

什么叫做slow-down，求解释
赞一下 回复此楼
nozuonodie
4楼2016-03-04 17:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yvonne9044

新虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
qiu_ni: 金币+1 2016-03-05 13:33:11
他说的是降落pcr？最佳的退火温度需要摸索 我的方法是用梯度pcr仪不用温度都p一遍，还有一个方法就是二次pcr，基本就很亮了

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2016-03-04 18:31:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sandycool

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
也可能是引物的问题

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-03-04 20:29:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
qiu_ni: 金币+1 2016-03-05 13:32:55
建议你用第一次的PCR产物为模板，再进行一次pcr，我今天就是这样的，克隆一个植物里面的酶基因，你试试吧。pcr的条件可以不用改

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-03-04 20:44:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模板浓度是不是合适？参考所用酶的扩增条件中模板浓度要求。
引物质量高不高？二聚体？互补性？DNAMAN可以大体检测下。
PCR条件是否优化过？退火温度？闲摸索退火温度麻烦，可以试试Touch-down程序。
提基因组所用取材是否合理？该基因表达与否？
上面所说的二次PCR也可以但是注意设置对照，防止串管污染。
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-07 20:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qiu_ni 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 听说今天filecode变了 +20 布布和一二 2026-08-06 35/1750 2026-08-07 08:24 by 2549091707
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +4 archvillain 2026-08-06 8/400 2026-08-07 08:06 by 带你看大海
[基金申请] filecode +11 等待解的谜 2026-08-06 15/750 2026-08-07 07:51 by wittywong
[基金申请] 基金中了 +8 laoda193707 2026-08-06 8/400 2026-08-07 07:37 by emeraldine
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ANUsWpSnuWQD 2026-08-06 4/200 2026-08-07 04:46 by nSM3ys5fefM3
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:19 by 苏知砚
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭