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qiu_ni

银虫 (小有名气)

[交流] PCR 条带不亮

PCR扩增几条氮循环相关的基因,引物是由已知序列设计的,但是扩增结果不理想,大多数条带都不是很亮,与所跑Marker 相差甚远。试图增加过扩增循环数,但是效果不理想,也增加过退火温度,但有的基因就直接扩增不出来。求问各位大神这是怎么回事?能否给点参考意见。不甚感激。
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nozuonodie
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卡维斯

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
模板浓度是不是合适?参考所用酶的扩增条件中模板浓度要求。
引物质量高不高?二聚体?互补性?DNAMAN可以大体检测下。
PCR条件是否优化过?退火温度?闲摸索退火温度麻烦,可以试试Touch-down程序。
提基因组所用取材是否合理?该基因表达与否?
上面所说的二次PCR也可以但是注意设置对照,防止串管污染。
8楼2016-03-07 20:07:20
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Esther_zhang

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
qiu_ni: 金币+1, 可以试试 2016-03-04 15:30:31
可以从增加引物浓度或者模板量,降低退火温度等方面试试啊。你增大退火温度,估计只会越P越弱。
2楼2016-03-04 15:21:03
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ken19860823

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
qiu_ni: 金币+1 2016-03-04 17:00:07
用slow-down的程序吧,百试不爽。
做基因修饰的老菜鸡
3楼2016-03-04 15:41:08
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qiu_ni

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-04 15:41:08
用slow-down的程序吧,百试不爽。

什么叫做slow-down,求解释
nozuonodie
4楼2016-03-04 17:00:03
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