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高山流水循

木虫 (小有名气)

[求助] 转化的阳性克隆子在抗性平板上能生长，但转移到有相应抗性的液体LB上就不长了 已有6人参与

转化的阳性克隆子在抗性平板上能生长，但转移到有相应抗性的液体LB上就不长了，求解释

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1楼 2016-02-29 17:11:07
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-29 22:52:11
你把阳性菌在重接个板看看，可能你这个阳性菌是假阳性的。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2016-02-29 17:16:03
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-29 22:52:23
同意楼上的观点，可能是假阳性。还有一种可能，就是你接种到液体培养基时，接种量太低，也可能长不起来。
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3楼2016-02-29 19:39:07
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
假阳性很正常，挑完菌菌落pcr鉴定，你这种情况很可能是平板抗性失效或者液体LB抗生素加的过多，前者可能性比较大，还有就算转化是空载体还是可以摇出菌的，最好直接测序，方便。
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8楼2016-03-02 09:49:24
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普通回帖

高山流水循

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-02-29 17:16:03
你把阳性菌在重接个板看看，可能你这个阳性菌是假阳性的。

为什么假阳性还能在抗性平板上生长？

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4楼2016-03-01 23:00:26
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hc123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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楼主确定挑取的为阳性克隆？有些单菌落旁边长有一圈小菌落实际上为该菌落代谢产生，不是你要的抗性克隆子，其次，是否培养时间较短？

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5楼2016-03-01 23:36:02
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jackyoung

新虫 (正式写手)
平板可能失效，或者液体培养基中抗生素浓度偏高。如此

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CestLaVie
6楼2016-03-02 08:22:30
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高山流水循

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc123 at 2016-03-01 23:36:02
楼主确定挑取的为阳性克隆？有些单菌落旁边长有一圈小菌落实际上为该菌落代谢产生，不是你要的抗性克隆子，其次，是否培养时间较短？

我是用双酶切切片段，然后用目的片段连接，转化，常理只有连上了，才能表达抗性，才能生长；另外酶切片段转化后也能长出几个菌落，但鉴定不是阳性

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7楼2016-03-02 09:03:12
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高山流水循

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hanyu426980 at 2016-03-02 09:49:24
假阳性很正常，挑完菌菌落pcr鉴定，你这种情况很可能是平板抗性失效或者液体LB抗生素加的过多，前者可能性比较大，还有就算转化是空载体还是可以摇出菌的，最好直接测序，方便。

在平板上，如果抗性失效，那么感受态细胞会长很多啊，而平板上只有20个菌株

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9楼2016-03-02 19:42:50
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sloop112

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
10楼2016-03-03 15:56:45
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