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高山流水循

木虫 (小有名气)

[求助] 转化的阳性克隆子在抗性平板上能生长,但转移到有相应抗性的液体LB上就不长了 已有6人参与

转化的阳性克隆子在抗性平板上能生长,但转移到有相应抗性的液体LB上就不长了,求解释

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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-29 22:52:11
你把阳性菌在重接个板看看,可能你这个阳性菌是假阳性的。
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2016-02-29 17:16:03
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-02-29 22:52:23
同意楼上的观点,可能是假阳性。还有一种可能,就是你接种到液体培养基时,接种量太低,也可能长不起来。
3楼2016-02-29 19:39:07
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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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假阳性很正常,挑完菌菌落pcr鉴定,你这种情况很可能是平板抗性失效或者液体LB抗生素加的过多,前者可能性比较大,还有就算转化是空载体还是可以摇出菌的,最好直接测序,方便。
8楼2016-03-02 09:49:24
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普通回帖

高山流水循

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-02-29 17:16:03
你把阳性菌在重接个板看看,可能你这个阳性菌是假阳性的。

为什么假阳性还能在抗性平板上生长?

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4楼2016-03-01 23:00:26
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hc123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主确定挑取的为阳性克隆?有些单菌落旁边长有一圈小菌落实际上为该菌落代谢产生,不是你要的抗性克隆子,其次,是否培养时间较短?

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5楼2016-03-01 23:36:02
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jackyoung

新虫 (正式写手)

平板可能失效,或者液体培养基中抗生素浓度偏高。如此

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CestLaVie
6楼2016-03-02 08:22:30
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高山流水循

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by hc123 at 2016-03-01 23:36:02
楼主确定挑取的为阳性克隆?有些单菌落旁边长有一圈小菌落实际上为该菌落代谢产生,不是你要的抗性克隆子,其次,是否培养时间较短?

我是用双酶切切片段,然后用目的片段连接,转化,常理只有连上了,才能表达抗性,才能生长;另外酶切片段转化后也能长出几个菌落,但鉴定不是阳性

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7楼2016-03-02 09:03:12
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高山流水循

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hanyu426980 at 2016-03-02 09:49:24
假阳性很正常,挑完菌菌落pcr鉴定,你这种情况很可能是平板抗性失效或者液体LB抗生素加的过多,前者可能性比较大,还有就算转化是空载体还是可以摇出菌的,最好直接测序,方便。

在平板上,如果抗性失效,那么感受态细胞会长很多啊,而平板上只有20个菌株

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9楼2016-03-02 19:42:50
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sloop112

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

10楼2016-03-03 15:56:45
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