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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] Gibson Assembly 一直做不出来,好伤心已有2人参与

我的片段大小:
片段1:6823bp
片段2:499bp
片段3:400bp

片段浓度:
片段1:112.5ng/ul
片段2:126.2ng/ul
片段3:113.3ng/ul

我的mix之前用的NEB mix ,今天又重新配了一次。

之前的体系
片段1:6ul
片段2:0.35ul
片段3:0.35ul
mix:6.65ul
50度1小时。
不行。

今天我做了一个体系:
片段1:2ul
片段2:1.2ul
片段3:1.2ul
mix:4.4ul



片段1:1.5ul
片段2:1.8ul
片段3:1.8ul
mix:5.1ul


还有一个
片段1:1.5ul
片段2:1.8ul
片段3:1.8ul
mix:5.1ul
ddH2O:4.9ul

请大神帮忙看看
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by kaka369 at 2016-02-27 12:42:21
我最近刚做了一个IN-FUSION跟你的差不多原理,我把我的经验告诉你一下,三个片段同时连接效率很低的,我是把三个片段同时插入到质粒中,片段大小分别是:2.3kb, 1kb, 700bp。我挑了40个班,大约一半的克隆能连进2.3 ...

嗯嗯,好呢,多谢

发自小木虫Android客户端
7楼2016-02-27 21:03:36
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)

2楼2016-02-27 09:24:16
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)

3楼2016-02-27 09:24:29
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


4楼2016-02-27 10:31:55
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