| 查看: 3947 | 回复: 4 | ||
[求助]
求酵母菌 ITS区 PCR 引物及反应条件 已有1人参与
|
|
求！ 真菌（主要是酵母及酵母样真菌）pcr扩增 ITS区 条件和引物序列 和 PCR条件？ 用于测序鉴定用的我用的ITS1 和 ITS4引物 ，文献中查到的序列 各一条 没有上下游区分；预变性94度 3min，变性94度30s和1min都试过，退火时间30s和1min都试过，梯度退火50度-60度 都没扩增出来；换了别人的taq酶没扩增出来，也换了PCR仪 都没有扩增出来，电泳一片空白 请教各位，我哪里出现问题了呀？ 各位谁做过真菌 ITS？可以告诉我你们的引物序列吗？还有反应条件 谢谢啦！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR-DGGE引物GC夹子问题
已经有2人回复
2楼2016-02-26 13:59:18
Bioexperixgs
新虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 672.9
- 散金: 337
- 红花: 8
- 帖子: 330
- 在线: 39.2小时
- 虫号: 2330746
- 注册: 2013-03-08
- 专业: 病原微生物变异与耐药
【答案】应助回帖
| 我用的是分子克隆上的快速提取法提酵母基因组，没什么问题。大于2.1对于PCR扩增影响不大！变性时间一般30S就够了，退火温度楼主看一下两个引物的Tm值，再上下加减5度做一个梯度PCR就可以找到最适退火温度了。延伸时间看的是你产物长度，一般1~2kb/min。最好调整一下模板至终浓度20ng/μl，用的时候加1~2μl足够了，一般模板浓度不是特别高的话影响不大的。电泳的时候Marker有条带吗？如果有就不是电泳的问题了。Loading buffer降解也会使电泳条带看不到或弥散。一个一个问题进行排除吧。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
envangline3楼2016-03-07 14:02:45
Bioexperixgs
新虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 672.9
- 散金: 337
- 红花: 8
- 帖子: 330
- 在线: 39.2小时
- 虫号: 2330746
- 注册: 2013-03-08
- 专业: 病原微生物变异与耐药
4楼2016-03-07 14:03:51
5楼2016-03-30 14:02:46