为什么我用ncbi设计的引物再拿回去primer-blast检查引物特异性的时候并没有blast到我想要的那个基因？（已经检查过Tm值物种选择等参数设计）

之前看的帖子都是用primer-blast，我把primer里所有的简并碱基都换成N之后试了一下，匹配不出来，没有任何结果。求助一下大佬，这样的结果是不是说明我的primer特异性不行？有没有什么网站...

想设计一个物种的18SrDNA引物，用NCBI的primer-blast设计报错，提示‘模板低于5个有效碱基’，如图。但我模板栏里填的是Access号啊，是什么情况呢。微信图片_20210531151242.png

RACE416方案11使用PCR筛选克隆422信息栏424第8章生物信息学431导言432方案1使用ucsc基因组浏览器将基因组注释可视化434方案2使用BLAST和ClustalW进行序列比对和同源性检索444方案3使用...

在做这类实验前的设计一般只要选好软件基本都不会有问题，我用的是Oligo7和PP5，MSP的设计是用MethylPrimerExpressv1.0其他的引物设计网站也行，如Primer-BLAST。在设计时，一定要和文献上...

有没有人知道primer-blast怎么用阿、为啥我的老显示Exceptionerror:Noaliasorindexfilefoundfornucleotidedatabase[refseq_rna]insearchpathexport/home/service/grid_nodes/primertool:/...

[info2]EmploymentofNearFull-LengthRibosomeGeneTA-CloningandPrimer-BlasttoDetectMultipleSpeciesinaNaturalComplexMicrobialCommunityUsingSpecies-Specific...

文献中有详细的PCR和酶切体系，但是结果未给出凝胶电泳图，也没有写酶切产物片段大校我自己在Primer-BLAST里查到了PCR产物的大小，但是不知道如何查酶切产物大校请问如何才能确定酶切产物...

已经使用oligo进行打分，筛选出的引物并不能肯定是针对特定基因扩增，然后用primer－blast分析引物，跑出的结果并没有我想要的物种，请问该如何确定手上的引物特异性好？

下面我打算用大肠试一下，看看是否会和我用的人类的引物反应（我感觉根本就是放屁，都用primer-blast查过的）不然就只能测序了想请问各位老师，您们认为这是引物二聚体吗？另外有什么办法...

求大神看看为什么没有结果？小弟菜鸟一枚2ME(0FKVR_[6[Q}C~6~)936.png

请问引物设计用Primer-Blast出现Exceptionerror:CFastaOstream:locationoutofrange:lcl|Query_1:1-1009.请问是什么错误

这几天想设计几对引物，于是用到了Primer-Blast。越做疑问越多，请大神看下我上传的那张图片在得到结果后，我想知道最上面标记方向的红条和黑条分别代表什么？我设计的引物产物落在黑条范围...

出现了下面网页出现的现状，我怎么选择埃请大家指教'http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/primertool.cgi?ctg_time=1420514985&job_key=FA__5JLuO8oAcgR8ZVI2An5_BBNtYBkW'

第一步要输入模板我找到的模板是基因组，输入的基因组的Accession总是出来如图2说没有这些序列，这是怎么回事呢？基因组的所有序列的Accessionnumber应该怎么获得啊？496B1211-ED69-4F6B-...

BLAST:Anewgenerationofproteindatabasesearchprograms....withoutuseofpreparativeultracentrifuge.1546963Primer-directedenzymaticamplificationofDNAwithathermostableDNApolymerase....

要做singlecellqPCR，要设计90多个引物，现在使用NCBI的PRIMER-blast设计的primer，两个引物分别在两个exon上，primer-blast给出了一些跨内含子的引物，并且有同源对比之类的，但是这些引物...

问题2：因为转化植物时用到的载体标志基因是nptII，我在NCBI上查到了该标志基因的序列，然后用primer5设计出序列进行PCR检测，结果...我也Blast了nptII与该植物的序列，发现两者序列很少重合，...

如题，鄙人设计检测时用NCBI/Primer-BLAST，结果显示Graphicalviewofprimerpairs这一栏，显示Unabletoregistertracks:notracksregistered。这是怎么回事，不知道是哪里条件选错了。半年前...

我想进行引物的特异性检验，进入primer-blast，怎么设置一些参数？结果如何分析？直接在序列框中输入上空格分开下游引物blast的结果有其他的菌，但是分值低，有些是单条匹配，能说明特异性...

各位前辈，我在构建质粒时遇到了难事，最初设计一对基因全长primer，在组织cDNA中PCR验证引物好用，电泳明确见两个条带（该基因...测序结果BLAST后与NCBI上两个viarant一致，可后来构建质粒后...

引物一共是3对，都没有弄出来，图上的是优化后的引物（用primer5设计的...PCR图.PNG2.PNG3.PNGIFN-γ-1.PNGIFN-γ-1BLAST.PNGIFN-γ-2BLAST.PNG[Lasteditedby喵了个咪yayaon2013-7-17at15:18]

小弟最近要做荧光定量，设计了几对引物，为了验证引物的特异性，用primer-blast检测，结果如图所示，第一个为我设计用的基因序列，后面两个说明什么，是不是特异性不好？这几个基因使一个...