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分类	共搜索到 652 个相关话题(最多显示前5000个)	作者	最后发表

分子生物	蛋白表达两个基因，在基因组上是连到一起的（上一个基因的TAA最后一个A是下一个基因ATG中的A），将两个基因分别连接到pET-28a，都能表达，连接到pACYCDuet智力上的不同位点后就不表达了，这是为什么...	无难事	2024-12-18 01:29
分子生物	大肠双质粒发酵OD相差较大求助,大肠杆菌发酵时，转化了两株菌，一种是PACYCDuet质粒转化到BL21(DE3)，另外一种是PACYCDuet和PET28A双质粒共转到BL21(DE3）中，加入诱导剂后两株菌OD相差特别大，问下各位大佬是什么...	YYIN111	2024-12-03 07:46
分子生物	质粒共转化求助大家好，我使用pET-28a与pET-22b两个质粒分别携带一个目的基因，然后共转化进BL21，双抗进行筛眩然后一个菌落的菌p我做了两管，1管是pET-28a通用引物+28a质粒上目的基因下游引物，另外1管是...	无难事	2024-11-01 02:26
分子生物	重组菌株的表达求讲解，用pet28a（+）做载体构建重组质粒，然后测序出来后发现我的基因序列没克隆完全，还差30多个bp，用这个重组质粒去表达也没有表达出来，这跟我的目的基因下游引物没有终止子有关吗？...	柚子5114	2024-10-15 02:28
文献求助	重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性李睿，王革，钱秋娟，王秉翔重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性《微生物学免疫学进展》2012年第4期1-5,共5页	bio转录组	2024-07-03 02:02
生物科学	蛋白激酶胞内结构域原核表达纯化蛋白质出现在菌体沉淀中该怎么... 蛋白原核表达不出来，有没有什么办法？本人最近在做磷酸化实验，目前在纯化一个激酶，将kinasedomain（跨膜结构域已去除）的序列构建到GST载体...之前也用过pET-28a载体纯化，也是同样的情况。	fightingbj	2024-06-07 03:33
分子生物	蛋白激酶原核表达纯化蛋白质出现在菌体沉淀中该怎么纯化蛋白原核表达不出来，有没有什么办法？本人最近在做磷酸化实验，目前在纯化一个激酶，将kinasedomain（跨膜结构域已去除）的序列构建到GST载体...之前也用过pET-28a载体纯化，也是同样的情况。	fightingbj	2024-06-07 03:03
分子生物	原核表达诱导不出来，6月份还能诱导出来，同样的条件现在诱导不... 最近尝试表达纯化真菌的几丁质酶和丝氨酸蛋白酶（1200bp），使用pet28a作为载体、转到bl21(de3)里。6月底和师姐一起连接转化时表达出来蛋白，7月份用碧云天his标签纯化试剂盒没纯化出来。9...	出被窝	2023-11-02 04:13
硕博家园	大肠杆菌无法表达出外源基因最近做大肠杆菌表达外源基因(来源于细菌，密码子优化过)。pet-28a载体，测序全正确，但是诱导后没有检测到蛋白表达。这是什么原因呢	Zhaoqiong1	2023-10-20 10:18
硕博家园	请教如图，pet-28a载体启动子和RBS中间缺失一个碱基，会对阅读框有影响吗	Zhaoqiong1	2023-10-07 11:41
硕博家园	大肠杆菌克隆表达外源基因的大佬看过来最近做了几十个基因，利用pet-28a在大肠杆菌bl21中表达。几乎都是包涵体，绝大多数菌体破碎后仍浑浊。想请教几个问题1.破碎后菌体仍浑浊是因为包涵体的存在吗？还是因为菌体没被破碎开？...	Zhaoqiong1	2023-09-15 12:43
分子生物	大肠杆菌转化提质粒PCR有条带，酶切无条带 pet28a为载体，连接目的基因（为了对比做了两个公司的连接酶）导入大肠杆菌DH5α，挑取平板长的单菌落（平板抗性没问题），过夜摇菌提质粒，提的质粒做模板PCR验证和酶切验证，结果是PCR有...	食品考研！	2023-08-15 01:22
分子生物	关于大肠杆菌pet28a载体上限制性内切酶位点的选择想请教一下大家，BanmHI和Xhol共同工作时的酶切效率高吗...或者是在28a上哪两个内切酶共同酶切的效率比较高吗？希望能够得到回复，在蛋白表达这方面刚刚初入还是菜鸟级别，恳请大家的帮助求求	是辣辣	2023-08-13 12:13
分子生物	目的基因克隆进入pet28a载体是否在上游引物上要加ATG 找到的一个基因它的CDS开头不是ATG，是GUG，我想把这段基因CDS通过双酶切连到pet28a载体上，但是我又看到PET28a表达载体有起始密码子ATG和核糖体结合位点，把插入序列就能进行表达，请问我...	食品考研！	2023-07-24 12:13
分子生物	家人们有大肠杆菌蛋白表达载体pGEX-4T-1吗想通过置换获得这个表达载体，我们课题组载体有pET系列的28a、32a、42a，真核载体pAc5.1-V5/HisA、pAc5.1-V5/HisB、pMT/BIP/V5-HisA	a1370585309	2023-07-22 01:19
微生物	大肠杆菌在M9培养基中不生长从LB平板上挑的TOP10菌接到M9里面，死活就是不生长。有人遇到过这种情况么？是怎么解决的呢？Top10带我pet28a质粒	971731043	2023-05-18 12:54
导师招生	2023/2024博士微生物/食品发向学生自荐克罗诺坂崎杆菌crispr敲除体系建立共构建4个不同骨架的crispr敲除质粒，分别为puc19-espcas9、pbbr-espcas9、pet28a-espcas9和pb4t-espcas9，除puc19-espcas9（转化后无法正常表达espcas9...	feidi1142	2023-05-12 02:39
硕博家园	GST纯化目的蛋白降解与有杂带 5.该基因我还构建了pet28（his标签，上清表达，表达量远低于gst融合蛋白相当）、pet32a(trxa+stag=his标签,胞内上清表达，表达量和gst融合蛋白相当），之前试过纯32a，杂带非常多，不知...	圆圈爱圈圆	2023-04-28 08:50
分子生物	GST纯化目的蛋白降解与有杂带 5.该基因我还构建了pet28（his标签，上清表达，表达量远低于gst融合蛋白相当）、pet32a(trxa+stag=his标签,胞内上清表达，表达量和gst融合蛋白相当），之前试过纯32a，杂带非常多，不知...	圆圈爱圈圆	2023-04-28 08:37
药学	关于蛋白标签的介绍说明常见的带6XHis的载体有pET-28a(+)、pET-28b、pET-22b(+)、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pACYC-duet1等2）Flag标签蛋白图片Flag标签蛋白（DYKDDDDK，编号：133742）应用于蛋白表达、纯化、鉴定、...	专注多肽	2023-04-04 02:15
分子生物	pet28a his标签蛋白各位前辈，我想问下如果我的载体是pet28a，酶切位点是BamHⅠ和HindⅢ，我设计的引物没去掉起始密码子和终止密码子，那这样我表达出来的目的蛋白能带上pet28aN端的HIS标签蛋白吗？...	鬼面骑士	2022-11-10 03:10
硕博家园	pet28a his标签蛋白各位前辈，我想问下如果我的载体是pet28a，酶切位点是BamHⅠ和HindⅢ，我设计的引物没去掉起始密码子和终止密码子，那这样我表达出来的目的蛋白能带上pet28aN端的HIS标签蛋白吗？	鬼面骑士	2022-11-10 12:26
生物科学	pET-28a原核表达求助求问我使用pET-28a原核表达，我的蛋白预测20kDA，用这个载体表达出来大概多大？非常感谢，急	苦力怕先生	2022-11-02 05:41
分子生物	pET-28a原核表达求助本人构建上的片段Expasy预测20kDA，想问使用pET28a表达出来的蛋白最终理论大小是多少，今天跑了个电泳，有亮的条带但是不知道是不是，真心求教！	苦力怕先生	2022-11-01 09:19