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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大肠杆菌转化提质粒PCR有条带，酶切无条带
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食品考研！

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌转化提质粒PCR有条带，酶切无条带 已有1人参与

pet28a为载体，连接目的基因（为了对比做了两个公司的连接酶）导入大肠杆菌DH5α，挑取平板长的单菌落（平板抗性没问题），过夜摇菌提质粒，提的质粒做模板PCR验证和酶切验证，结果是PCR有目的条带，但是酶切几乎都没有目的条带，偶尔十分之一的概率可能会出现一个有目的条带的，请问这是咋回事呢（两个公司的酶做出来都是这样子的）？

是假阳性太多了吗，怎么避免呢？？
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1楼 2023-08-15 21:12:22
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用该载体的通用引物测序多个样，看酶切位点还在不在
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2楼2023-08-16 09:33:20
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
也不用测多个样，就拿一个能pcr扩出条带但是不能酶切的样，用通用引物扩增测序，看看是不是点突变也好引物设计错误也好造成的酶切位点序列不对了
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3楼2023-08-16 09:40:40
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食品考研！

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shuaibia6 at 2023-08-16 09:40:40
也不用测多个样，就拿一个能pcr扩出条带但是不能酶切的样，用通用引物扩增测序，看看是不是点突变也好引物设计错误也好造成的酶切位点序列不对了

好的，我去送个样测序看看

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4楼2023-08-16 10:26:06
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