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柚子5114

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 28
帖子: 5
在线: 40分钟
虫号: 35248614
注册: 2024-04-01
专业: 微生物学

[交流] 重组菌株的表达已有1人参与

求讲解，用pet28a（+）做载体构建重组质粒，然后测序出来后发现我的基因序列没克隆完全，还差30多个bp，用这个重组质粒去表达也没有表达出来，这跟我的目的基因下游引物没有终止子有关吗？会不会是因为我的目的片段后面的那一段序列他的结构影响了我的表达？

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1楼 2024-10-15 10:38:28

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

strongFv

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 31.3
帖子: 29
在线: 45.2小时
虫号: 24591529
注册: 2020-11-17
专业: 发育生物学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

基因序列没有克隆完全的话，是有很大概率可能会影响表达的。一方面是要用高保真酶做扩增，避免这一步产生突变；另一方面是酶切位点、同源臂这些要选好。如果原因不好排除的话，可以直接用pET28a的专用构建试剂盒（达领生物的），线性化载体+连接酶+酶切位点和验证过的同源臂，都是现成的。

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