| 查看: 881 | 回复: 5 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者出被窝将赠送您 15 个金币 | ||
[求助]
原核表达诱导不出来，6月份还能诱导出来，同样的条件现在诱导不出来了
|
||
|
最近尝试表达纯化真菌的几丁质酶和丝氨酸蛋白酶（1200bp），使用pet28a作为载体、转到bl21(de3)里。6月底和师姐一起连接转化时表达出来蛋白，7月份用碧云天his标签纯化试剂盒没纯化出来。9月——11月发现诱导都诱导不出来了，我还把之前冻存的菌液拿出来也不行，诱导步骤都一样，重送出去测序也没问题（生工测序，测出的片段序列和我插入进去的是同一个片段）。我重新连接转化按原步骤重新构建了质粒，也是测序正确诱导不出来啊啊啊啊啊啊 我诱导条件:37℃ 180r 过夜诱导 iptg浓度0.1mM-2mM设了5个梯度，没一个出来的 或者我16或25℃诱导试试？ 我接下来要尝试连32a吗？ 或者更换感受态？ 话说是这应该质粒的问题还是感受态的问题啊？ 求助各位大神帮忙分析一下原因   6月份的.png  昨天的.png |
回复此楼» 猜你喜欢
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
-
推荐一些基础有机化学的实验教程
已经有0人回复
-
探秘高分子世界：链动微观，筑就材料新篇
已经有0人回复
-
科研赋能时尚宠物：检测护航，焕新养宠体验
已经有0人回复
-
精测粗蛋白：以科研标尺，守品质核心
已经有0人回复
-
解码碳水世界：科研探秘，赋能营养与应用
已经有0人回复
-
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
乌克兰跑男
铜虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1588
- 散金: 420
- 帖子: 663
- 在线: 55.1小时
- 虫号: 29162179
- 注册: 2022-03-15
- 性别: GG
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
2楼2023-11-02 13:49:04
xn8008
至尊木虫 (知名作家)
Balance Angel
- 应助: 83 (初中生)
- 贵宾: 1.637
- 金币: 35817.4
- 散金: 828
- 红花: 45
- 沙发: 1
- 帖子: 5800
- 在线: 374.9小时
- 虫号: 987679
- 注册: 2010-04-02
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
出被窝3楼2023-11-02 15:39:47
4楼2023-11-02 16:19:07
|
1.要换算下对应的蛋白分子量 以及载体插入的酶切位点加上载体的表达的氨基酸分子量 2.用非诱导的作为对照 3.注意加抗性培养基筛选目的菌 4.加我qq我来系统指导 5.欢迎找我选购试剂仪器 优惠多多 价格可谈可开票 发自小木虫Android客户端 |
5楼2023-11-04 19:01:11
6楼2023-11-04 21:54:10