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出被窝

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 34.5
帖子: 16
在线: 9小时
虫号: 26019719
注册: 2021-03-25
专业: 兽医寄生虫学

[求助] 原核表达诱导不出来，6月份还能诱导出来，同样的条件现在诱导不出来了

最近尝试表达纯化真菌的几丁质酶和丝氨酸蛋白酶（1200bp），使用pet28a作为载体、转到bl21(de3)里。6月底和师姐一起连接转化时表达出来蛋白，7月份用碧云天his标签纯化试剂盒没纯化出来。9月——11月发现诱导都诱导不出来了，我还把之前冻存的菌液拿出来也不行，诱导步骤都一样，重送出去测序也没问题（生工测序，测出的片段序列和我插入进去的是同一个片段）。我重新连接转化按原步骤重新构建了质粒，也是测序正确诱导不出来啊啊啊啊啊啊

我诱导条件:37℃ 180r 过夜诱导 iptg浓度0.1mM-2mM设了5个梯度，没一个出来的
或者我16或25℃诱导试试？

我接下来要尝试连32a吗？或者更换感受态？话说是这应该质粒的问题还是感受态的问题啊？

求助各位大神帮忙分析一下原因