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原核表达诱导不出来，6月份还能诱导出来，同样的条件现在诱导不出来了
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最近尝试表达纯化真菌的几丁质酶和丝氨酸蛋白酶（1200bp），使用pet28a作为载体、转到bl21(de3)里。6月底和师姐一起连接转化时表达出来蛋白，7月份用碧云天his标签纯化试剂盒没纯化出来。9月——11月发现诱导都诱导不出来了，我还把之前冻存的菌液拿出来也不行，诱导步骤都一样，重送出去测序也没问题（生工测序，测出的片段序列和我插入进去的是同一个片段）。我重新连接转化按原步骤重新构建了质粒，也是测序正确诱导不出来啊啊啊啊啊啊 我诱导条件:37℃ 180r 过夜诱导 iptg浓度0.1mM-2mM设了5个梯度，没一个出来的 或者我16或25℃诱导试试？ 我接下来要尝试连32a吗？ 或者更换感受态？ 话说是这应该质粒的问题还是感受态的问题啊？ 求助各位大神帮忙分析一下原因   6月份的.png  昨天的.png |
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2楼2023-11-02 13:49:04
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- 专业: 疫苗学
出被窝3楼2023-11-02 15:39:47
4楼2023-11-02 16:19:07
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1.要换算下对应的蛋白分子量 以及载体插入的酶切位点加上载体的表达的氨基酸分子量 2.用非诱导的作为对照 3.注意加抗性培养基筛选目的菌 4.加我qq我来系统指导 5.欢迎找我选购试剂仪器 优惠多多 价格可谈可开票 发自小木虫Android客户端 |
5楼2023-11-04 19:01:11
6楼2023-11-04 21:54:10