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Hxiaopl

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒提取电泳条带不正确已有5人参与

想请教一下,提完质粒跑电泳,质粒大小是5000bp,但是条带只有第一次电泳正确了,后面用这管提取的质粒再次电泳一直在8000bp,没有目的条带,重新摇菌提取也是在8000bp,这是怎么回事呀

用的天根质粒小提试剂盒

双酶切再次电泳也是8000多bp,然后接着拿去做酶切连接转化,验证的质粒构建是否成功的时候,再次双酶切,还是只有8000多的条带,没有插入的片段(700bp),但用质粒pcr,又能p出插入片段的条带

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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by Hxiaopl at 2022-07-19 10:58:38
谢谢,就是我重新提取了一遍质粒,然后还是条带不正确,我试着继续往下做了,插入目的片段,酶切连接转化,通过提取转化的菌的质粒,进行pcr,可以得到插入片段的条带,但是还是得不到正确的质粒大小的条带,我感觉 ...

分子生物模糊不得  有就是有,没有就是没有。建议楼主都确定了再往下做,不然重新做一遍构建很累人

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我思故我在
10楼2022-08-07 03:05:57
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围脖

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感觉你表述不清,个人感觉,非专业

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2楼2022-07-19 08:06:28
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Hxiaopl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 围脖 at 2022-07-19 08:06:28
感觉你表述不清,个人感觉,非专业

刚学分子实验,在自己摸索

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3楼2022-07-19 10:05:32
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Hxiaopl

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Hxiaopl at 2022-07-19 10:05:32
刚学分子实验,在自己摸索
...

就是提取完质粒去电泳,条带第一次正确,第二次就不对了,看了网上的分析,就酶切后再去跑电泳,还是条带不正确,用的都是用一次提取的质粒。就是不明白为什么条带会突然不正确,不敢往下做

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4楼2022-07-19 10:07:37
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