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毛阿毛

金虫 (正式写手)

[求助] OPA测水解度的问题 已有2人参与

求助求助,各路有经验的达人,非常希望 可以 不吝赐教!!! 此问题已困扰本人许久,着实抓狂,食不知味,夜不能寐。。。还望有经验的小伙伴可以指导1,2.。。。。先行谢过!!!

具体问题如下—

底物 100ml 乳清蛋白, 胰蛋白酶。
现比较 pH/Stat 方法 和OPA测水解度的方法。 采用 pH stat 记录base的消耗量,从而计算水解度,在不同的 Time intervals 取1ml 水解物 与0.5ml抑制剂混合后,dilute 10倍,采用OPA试剂与其反应,340nm处测量absorbance. 理论上吸光度应随着水解度的increase而增加,但事实上 数据非常混乱,未水解 底物的 吸光度竟然高于水解产物。
配置了不同浓度的乳清蛋白与lysine标注曲线,线性增长十分理想,这说明opa试剂不应存在问题,而且吸光度均在0.1至1之间,也属正常,但水解物的吸光度就是十分奇怪,无法观察到增长趋势。
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不改我心

金虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
sytucom: 应助指数-1, 无效应助,请认真回答楼主问题。 2016-02-24 09:59:01
加油!看好你!黑金币吧😄

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2016-02-24 04:13:41
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
毛阿毛(sytucom代发): 金币+5, 感谢应助,希望继续关注楼主回复,谢谢 2016-02-25 23:13:21
没做过OPA测水解度的,但这个方法很常见。但因为有毒,所以我使用TNBS法,这个没有毒,还比较稳定。
3楼2016-02-24 09:04:42
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 是水货 at 2016-02-24 09:04:42
没做过OPA测水解度的,但这个方法很常见。但因为有毒,所以我使用TNBS法,这个没有毒,还比较稳定。

我也看到很多papers 都有用OPA来测水解度,也看到测定乳清蛋白的水解物, 试了好几次,实在是想不明白  问题出在哪里了。。。然后OPA 也可以通过测fluorescence 测氨基的数量,所以我也试了fluorescence,发现一测水解物 就找不到规律。。。。。唉, 之前没考虑用TNBS 是觉得这个耗时长,因为每次样品都会比较多
4楼2016-02-24 16:36:22
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不改我心 at 2016-02-24 04:13:41
加油!看好你!黑金币吧😄

你要那么多金币干嘛。。。。。。谁帮我解决了这个问题,我把金币都送他了。。。。。。。。。。。
5楼2016-02-24 16:37:19
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不改我心

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 毛阿毛 at 2016-02-24 16:37:19
你要那么多金币干嘛。。。。。。谁帮我解决了这个问题,我把金币都送他了。。。。。。。。。。。...

要金币攒钱买回国的机票啊哈哈哈
6楼2016-02-24 16:50:58
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小天天298

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 毛阿毛 at 2016-02-24 16:36:22
我也看到很多papers 都有用OPA来测水解度,也看到测定乳清蛋白的水解物, 试了好几次,实在是想不明白  问题出在哪里了。。。然后OPA 也可以通过测fluorescence 测氨基的数量,所以我也试了fluorescence,发现一测水 ...

我想问一下TNBS法好测吗?我之前用过茚三酮法,没测出来,求指教!

发自小木虫Android客户端
7楼2016-03-09 07:31:44
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XuanYiFan26

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 是水货 at 2016-02-24 09:04:42
没做过OPA测水解度的,但这个方法很常见。但因为有毒,所以我使用TNBS法,这个没有毒,还比较稳定。

OPA有毒啊?

发自小木虫Android客户端
8楼2016-04-24 21:51:01
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XuanYiFan26

新虫 (小有名气)

请问这个问题解决了吗?我也遇到了这种问题

发自小木虫Android客户端
9楼2016-05-04 10:55:14
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