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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » OPA测水解度的问题
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毛阿毛

金虫 (正式写手)

[求助] OPA测水解度的问题 已有2人参与

求助求助，各路有经验的达人，非常希望 可以 不吝赐教！！！ 此问题已困扰本人许久，着实抓狂，食不知味，夜不能寐。。。还望有经验的小伙伴可以指导1,2.。。。。先行谢过！！！

具体问题如下—

底物 100ml 乳清蛋白， 胰蛋白酶。
现比较 pH/Stat 方法 和OPA测水解度的方法。 采用 pH stat 记录base的消耗量，从而计算水解度，在不同的 Time intervals 取1ml 水解物 与0.5ml抑制剂混合后，dilute 10倍，采用OPA试剂与其反应，340nm处测量absorbance. 理论上吸光度应随着水解度的increase而增加，但事实上 数据非常混乱，未水解 底物的 吸光度竟然高于水解产物。
配置了不同浓度的乳清蛋白与lysine标注曲线，线性增长十分理想，这说明opa试剂不应存在问题，而且吸光度均在0.1至1之间，也属正常，但水解物的吸光度就是十分奇怪，无法观察到增长趋势。
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1楼 2016-02-24 00:41:43
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XuanYiFan26

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 是水货 at 2016-02-24 09:04:42
没做过OPA测水解度的，但这个方法很常见。但因为有毒，所以我使用TNBS法，这个没有毒，还比较稳定。

OPA有毒啊？

发自小木虫Android客户端
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8楼2016-04-24 21:51:01
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不改我心

金虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
sytucom: 应助指数-1, 无效应助，请认真回答楼主问题。 2016-02-24 09:59:01
加油！看好你！黑金币吧😄

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2016-02-24 04:13:41
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
毛阿毛(sytucom代发): 金币+5, 感谢应助，希望继续关注楼主回复，谢谢 2016-02-25 23:13:21
没做过OPA测水解度的，但这个方法很常见。但因为有毒，所以我使用TNBS法，这个没有毒，还比较稳定。
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3楼2016-02-24 09:04:42
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毛阿毛

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 是水货 at 2016-02-24 09:04:42
没做过OPA测水解度的，但这个方法很常见。但因为有毒，所以我使用TNBS法，这个没有毒，还比较稳定。

我也看到很多papers 都有用OPA来测水解度，也看到测定乳清蛋白的水解物， 试了好几次，实在是想不明白  问题出在哪里了。。。然后OPA 也可以通过测fluorescence 测氨基的数量，所以我也试了fluorescence,发现一测水解物 就找不到规律。。。。。唉， 之前没考虑用TNBS 是觉得这个耗时长，因为每次样品都会比较多
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4楼2016-02-24 16:36:22
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