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wying0410

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】如何测定多肽含量?

我现在实验是做固态发酵,需要测定发酵前后多肽含量有无变化,想请问能测定么?怎么测?谢谢回答!
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abcde420

金虫 (小有名气)

样品中
蛋白肽的测定方法
1、原理
测定样品经三氯醋酸处理后上清液中蛋白质含量,既为样品中大豆蛋白肽的含量,也就是可溶性蛋白质(TCA)的含量。
2、试剂
所用试剂均用不含氨的蒸馏水配制。
2.1 10%三氯醋酸
其它试剂与《食品中蛋白质的测定方法》中2.1—2.6相同
3、仪器
定氮蒸馏装置
4、操作方法
4.1样品处理
4.1.1固体样品:精密称取2g左右固体样品用小烧杯溶解,并用玻璃棒搅拌,定容至100ml容量瓶中,取10ml注入比色管中,再加作入10ml 10%三氯醋酸,静止沉降30分钟后,过滤(或用离心机1万转离5分钟)取滤液(或上清液)5ml注入干燥的凯氏瓶中,加入2g催化剂及25ml混合酸,消化方法同蛋白质的测定方法相同
4.1.2样品:(如发酵液)经离心机1万转离5分钟吸取上清液10ml注入比色管中再加10ml 10%三氯醋酸,静止沉降30分钟后,过滤(或用离心机1万转离5分钟)取滤液(或上清液)5ml注入干燥凯氏瓶中,加2g催化剂及25ml混合酸进行消化。
4.2 蒸馏方法与蛋白质的测定方法相同。
4.3 计算                             
X=(V1-V2)×N×0.014×6.25×10/m×20/10×1/5×100/10×100
式中:
X—样品中可溶性蛋白质含量,% ;
V1—样品消耗硫酸或盐酸标准溶液体积,ml ;
V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液体积,ml ;
N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度 ;
0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数 ;
6.25—氮换算为蛋白质的系数。

[ Last edited by abcde420 on 2008-10-17 at 10:52 ]
成长是一种喜悦
5楼2008-10-17 10:51:24
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

你有标准品么?
如果没有,只能检测一个相对值了。
七窍通了六窍
2楼2008-10-10 16:41:16
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过而知之者

银虫 (小有名气)

我要做寡肽了,真烦心
3楼2008-10-10 20:37:25
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sunday1325

金虫 (初入文坛)

我也是做相关的试验,要测内切蛋白酶活力,苦于找不到方法,所以打算从多肽入手,以下是我个人的一些想法
肽是一类有较高生理活性的中小(分子量MW小于等于2300)蛋白质。高分子蛋白质MW大于等于300)易为单宁在酸性条件下沉淀。因此,将肽液经酸化后,加单宁使高分了物质沉淀,再测定滤液中蛋白质(多肽和游离氨基酸)和游离氨基酸的含量,最后用滤液中蛋白质含量减去氨基酸含量即为多肽的含量。
不知道是否可行
4楼2008-10-12 09:32:41
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