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利用高保真酶克隆基因没有加尾怎么办 已有5人参与
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刚开始做基因克隆，利用的高保真酶（takara Prime STAR），pcr完后直接切胶纯化后连接了，到最后发现效率特别低才听说要加尾，可现在的回收产物该如何利用呢？ 目前，问了人总结出三种：一是以回收产物为模板，用rtaq酶加尾，但回收产物用量得14.5，做过一次可能跟产物浓度有关，成功率50%，二是以回收产物为模板，继续用STAR酶，用量几微升就可以，然后再用rtaq延伸，三是几微升的用量，直接用rtaq酶跑pcr。 我实在是拿不准该怎么办，求大神指点迷津！（产物浓度大部分6左右，4、5个30左右，还有一些只有2、3）如果可以，提供个参考体系最感激不过！●﹏● 发自小木虫Android客户端 |
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18楼2016-03-04 21:35:58
hanxiaominhu
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2楼2016-02-21 18:34:24
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PCR结束后，往反应体系中加入rtaq和buffer，72度充分延伸半个小时就行 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-02-21 19:42:16
Ljch1121
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4楼2016-02-21 19:47:56