24小时热门版块排行榜    

查看: 1547  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ojooo2

银虫 (初入文坛)

[求助] 条带偏大 已有1人参与

我的从NCBI上找的mRNA序列(1800bp)设计的引物,从植物里提取RNA(两个不同来源),RT,然后用得到的DNA跑PCR,但是无论怎么跑电泳条带都在接近2500的地方,如果降低温度,只要有条带,必有2500的这个条带,而且相对特别亮。touch down PCR的条带也在接近2500这个位置。温度降到42°后1800bp出现条带的时候tublin的对照组也有条带,而且特别特别淡。
麻烦大家指点下。
回复此楼
素描的世界
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by ojooo2 at 2016-02-10 01:50:09
麻烦您,那您觉得我是否应该测序下呢?...

我一般是这么做的 测序然后看是否和原序列有重合部分 如果完全没有 代表扩增了别的地方 如果包含了原有序列还多出了一部分 那就要多想想之前的提纯和原料问题了
7楼2016-02-10 02:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

引物的特异性 blast一下你这个引物在植物基因库里位置 另外考虑对产物测序 可能网上序列和你用的细胞系不一样

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-02-09 04:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
ojooo2: 金币+60 2016-02-10 14:49:13
引物的特异性 blast一下你这个引物在植物基因库里位置 另外考虑对产物测序 可能网上序列和你用的细胞系不一样
3楼2016-02-09 17:00:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ojooo2

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fjtony163 at 2016-02-09 17:00:05
引物的特异性 blast一下你这个引物在植物基因库里位置 另外考虑对产物测序 可能网上序列和你用的细胞系不一样

谢谢您,我用的材料是从超市直接买来的香菜,我在blast里面找了,没有找到符合这个条带大小的序列
素描的世界
4楼2016-02-09 22:58:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见