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ojooo2

银虫 (初入文坛)

[求助] 条带偏大 已有1人参与

我的从NCBI上找的mRNA序列(1800bp)设计的引物,从植物里提取RNA(两个不同来源),RT,然后用得到的DNA跑PCR,但是无论怎么跑电泳条带都在接近2500的地方,如果降低温度,只要有条带,必有2500的这个条带,而且相对特别亮。touch down PCR的条带也在接近2500这个位置。温度降到42°后1800bp出现条带的时候tublin的对照组也有条带,而且特别特别淡。
麻烦大家指点下。
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素描的世界
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
ojooo2: 金币+60 2016-02-10 14:49:13
引物的特异性 blast一下你这个引物在植物基因库里位置 另外考虑对产物测序 可能网上序列和你用的细胞系不一样
3楼2016-02-09 17:00:05
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

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引物的特异性 blast一下你这个引物在植物基因库里位置 另外考虑对产物测序 可能网上序列和你用的细胞系不一样

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-02-09 04:31:29
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ojooo2

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fjtony163 at 2016-02-09 17:00:05
引物的特异性 blast一下你这个引物在植物基因库里位置 另外考虑对产物测序 可能网上序列和你用的细胞系不一样

谢谢您,我用的材料是从超市直接买来的香菜,我在blast里面找了,没有找到符合这个条带大小的序列
素描的世界
4楼2016-02-09 22:58:51
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fjtony163

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【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ojooo2 at 2016-02-09 22:58:51
谢谢您,我用的材料是从超市直接买来的香菜,我在blast里面找了,没有找到符合这个条带大小的序列...

毕竟基因库序列不见得是对的 所以有可能你手上的材料细胞实际序列不一样

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-02-10 00:24:57
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